FUTURE WORK

Este capítulo revisa los diferentes procedimientos de medida de acuerdo con el modo de análisis y los cálculos que son realizados para obtener los valores de concentración. Se indi- can las diversas fórmulas utilizadas. Los procedimientos de medida son los mismos para blan- cos, calibradores, controles y muestras. Los controles son tratados como muestras en todos los cálculos.

En las fórmulas se utilizan las abreviaciones siguientes:  Aλ  _principal  Absorbancia a la longitud de onda principal.

 Aλ  _referencia  Absorbancia a la longitud de onda de referencia.

 A_blanco  Absorbancia del blanco.  A_calibrador   Absorbancia del calibrador.  A_muestra  Absorbancia de la muestra.

 A_R2  Absorbancia del blanco, calibrador o muestra con el reactivo 2 (reacción global).  A_R1  Absorbancia del blanco, calibrador o muestra con el reactivo 1 (reacción del blan-

co de muestra).

 A_T1  Absorbancia del blanco, calibrador o muestra medida después de la incubación 1.  A_T2  Absorbancia del blanco, calibrador o muestra medida después de la incubación 2.  A_FRAC  Absorbancia de la fracción.

 A_TOTAL  Absorbancia total.

∆ A/min Velocidad de cambio de absorbancia del blanco, calibrador o muestra.

C_muestra Concentración de la muestra.

C_calibrador  Concentración programada del calibrador. n Número de replicados.

F Factor de calibración programado.

TR Factor fijo dependiente del tipo de reacción; su valor es (+1) para reacciones crecientes y (-1) para reacciones decrecientes.

Coef ₁ Coeficiente del numerador. Coef ₂ Coerficiente del denominador. V_cut-off  Valor de cut-off 

I_d Intervalo dudoso

∑∆_m Sumatorio de deltas de la muestra ∑∆_cal Sumatorio de deltas del calibrador 

N Número de intervalos

T Tiempo de intervalo (en segundos)

4.1. PUNTO FINAL

La absorbancia de la mezcla de reacción es medida una única vez. La absorbancia puede medirse a una (monocromática) o dos (bicromática) longitudes de onda. La calibración se basa en el uso de calibradores (uno o varios) o de un factor programado.

4.1.1. Cálculos en el modo de punto final0

4.1.1.1. Lecturas bicromáticas

El valor de absorbancia utilizado en los cálculos para el blanco, los calibradores y las muestras es la diferencia entre la absorbancia leída a la longitud de onda principal y la absorbancia leída a la longitud de onda de referencia.

 A_muestra, A_calibrador , A_blanco= A_{λ  principal}- A_{λ referencia}

4.1.1.2. Cálculos con factor 

Las concentraciones de cada muestra son calculadas mediante la siguiente fórmula:

C _muestra= ( A_muestra- A_blanco)·F·TR 

4.1.1.3. Cálculos con un calibrador único

La concentración de cada muestra se calcula usando la misma fórmula indicada anteriormen- te, pero F se obtiene como sigue:

C_calibrador 

F =

( A_calibrador- A_blanco)

4.1.1.4. Cálculos con varios calibradores

La concentración de cada muestra se calcula usando una curva de calibración obtenida me- diante la función de cálculo y los ejes seleccionados. Se prepara una curva de calibración a partir de los valores de concentración programados de los calibradores y de las absorbancias medidas para cada uno de ellos:

( A_calibrador - A_blanco)·TR 

La concentración de las muestras se calcula por interpolación de sus absorbancias en la curva:

( A_muestra- A_blanco)·TR 

4.1.1.5. Replicados

Pueden programarse hasta 3 replicados para cada blanco, para cada muestra, o para cada calibrador. Los replicados son tratados en los cálculos como sigue:

a) Se calcula primero el valor medio de absorbancia del blanco de reactivo:

Σ

 A _{blanco n}1

i=1 Ai

b) La absorbancia media del blanco es restada de cada absorbancia individual medida para los calibradores y las muestras. Los valores obtenidos se utilizan en el cálculo de las concentracio- nes.

 A_{calibr ador, muestra}= A_{calibrador, muestra}- A_blanco

c) En cálculos con calibradores, se obtiene el valor medio de absorbancia para cada calibrador:

4.2. DIFERENCIAL

Este modo de análisis requiere de dos reactivos para cada muestra, calibrador e incluso para el blanco de reactivo. El reactivo 1 corresponde al «buffer» o diluyente del reactivo de «traba-  jo» y el reactivo 2 es el reactivo de «trabajo (buffer + cromóforo). La calibración puede basarse

en el uso de calibradores o en un factor programado.

4.2.1. Cálculos en el modo diferencial

4.2.1.1. Cálculos con factor 

La concentración de cada muestra se calcula utilizando la siguiente fórmula:

C _muestra= (( A_{R2 muestra}- A_{R1 muestra})-( A_{R2 blanco}- A_{R1 blanco}))·F·TR 

4.2.1.2. Cálculos con un calibrador único

La concentración de cada muestra se calcula utilizando la misma fórmula mostrada arriba, pero F se obtiene como sigue:

4.2.1.3. Cálculos con varios calibradores

La concentración de cada muestra se calcula usando una curva de calibración obtenida utili- zando la función de cálculo y los ejes seleccionados. Se prepara una curva de calibración a partir de los valores de concentración programados de los calibradores y de las diferencias de absorbancia obtenidas para cada uno de ellos:

(( A_R2Calibrador - A_R1Calibrador) - ( A_R2Blanco - A_R1Blanco ))·TR 

La concentración de las muestras se calcula por interpolación de sus diferencias de absorbancia en la curva:

(( A_R2Muestra- A_R1Muestra) - ( A_R2Muestra - A_R1Muestra))·TR 

=

n n _i=1

Σ

 A_calibrador 

n

( A_calibrador- Valor medio A _blanco)

1

 F  Ccalibrador 

=

4.2.1.4. Replicados

Pueden programarse hasta 3 replicados para cada muestra, para cada calibrador y para cada blanco. Los replicados son tratados en los cálculos como sigue:

a) Se calcula primero el valor medio de la diferencia de absorbancias del blanco:

b) Se calcula la diferencia de absorbancia para el calibrador (cuando se utiliza) o replicado de muestra

 A_{R2 calibrador o muestra} - A_{R1 calibrador o muestra}

c) La diferencia de absorbancia media del blanco es restada de cada diferencia de absorbancia individual medida para el calibrador (cuando se utiliza) y las muestras. Los valores obtenidos se utilizan en el cálculo de las concentraciones.

 A_{R2 calibrador o muestra}- A_{R1 calibrador o muestra}- ( A_{R2 calibrador o muestra}- A_{R1 calibrador o muestra})

d) En cálculos con calibrador, se obtiene el valor medio de absorbancia para el calibrador:

4.3. TIEMPO FIJO

La absorbancia de la mezcla de reacción es leída a dos tiempos. La calibración puede basarse en el uso de calibradores (uno o varios) o en un factor programado.

4.3.1. Cálculos en el modo de tiempo fijo

4.3.1.1. Cálculos con factor 

La concentración de cada muestra se calcula utilizando la siguiente fórmula

C _muestra= ( A_{T2 muestra}- A_{T1 muestra})·F·TR 

4.3.1.2. Cálculos con un calibrador único

La concentración de cada muestra se calcula mediante la misma fórmula indicada arriba, pero F se obtiene como sigue:

1 n

Σ

n

i=1

( A_{R2 calibrador} - A_{R1 calibrador} )-( A_{R2 blanco}- A_{R1 blanco})

=

 A_calibrador 

( A_{T2 calibrador}- A_{T1 calibrador} )  F  C_calibrador  = 1

_Σ

n n i=1

( A_{R2 blanco}- A_{R1 blanco})_i

=

4.3.1.3. Cálculos con varios calibradores

La concentración de cada muestra se calcula usando una curva de calibración obtenida utili- zando la función de cálculo y los ejes seleccionados. Se prepara una curva de calibración a partir de los valores de concentración programados de los calibradores y de las diferencias de absorbancia obtenidas para cada uno de ellos:

( A_{T2 calibrador} - A_{T1 calibrador} )·TR 

La concentración de las muestras se calcula por interpolación de sus diferencias de absorbancia en la curva:

( A_{T2 muestra}- A_{T1 muestra})·TR 

4.4. CINETICA

El modo cinético se utiliza para medir la concentración de una actividad enzimática. La absorbancia de la mezcla de reacción es medida en 31 ocasiones durante el periodo de incubación programado. La calibración puede basarse en el uso de un calibrador o de un factor programado.

4.4.1. Cálculos en el modo cinético

4.4.1.1. Cálculos de velocidades y comprobación de linealidad

La actividad enzimática se mide por la velocidad de reacción que corresponde a la pendiente de la curva de absorbancia frente al tiempo, y que se calcula por el método de regresión lineal. La dimensión de la pendiente es DA/min.

Durante el periodo de lectura se obtienen 31 valores de absorbancia a intervalos regulares. Con cada conjunto de datos se lleva a cabo una búsqueda lineal para encontrar las porciones de linealidad de los datos. Los valores de absorbancia se dividen en tres segmentos, compren- diendo los valores de A₀ hasta A₁₀, A₁₀ hasta A₂₀, y A₂₀ hasta A₃₀. Las pendientes de cada segmento, así como la del conjunto de todos los datos, se calculan por regresión lineal, y se compara cada segmento con el resultado obtenido para todos los datos. Los segmentos que originan pendientes superiores o inferiores en un 20 % o más a la pendiente del conjunto son eliminados del cálculo final. Finalmente, la pendiente se calcula por regresión lineal de todos los valores comprendidos en los segmentos no desechados. Si los tres segmentos hubieran sido eliminados, se conservará para los cálculos la pendiente global.

4.4.1.2. Cálculos con factor 

La concentración de la muestra se calcula mediante la fórmula siguiente:

4.4.1.3. Cálculos con un calibrador único

La concentración de cada muestra se calcula utilizando la fórmula indicada arriba, pero F se obtiene como sigue:

4.4.2. Cinéticas múltiples

Para calcular la concentración en las cinéticas múltiples se utiliza el cálculo por deltas. Se lleva a cabo, para cada muestra, una primera lectura de la absorbancia frente a la LINEA DE BASE, después de un periodo de incubación programado. A continuación, se realizan nuevas lectu- ras a intervalos definidos de tiempo. La concentración se calcula multiplicando la media de incrementos (o decrementos) de absorbancia por minuto por un factor o con referencia a un calibrador.

4.4.2.1. Cálculos con factor 

La concentración de la muestra se calcula mediante la fórmula siguiente:

4.4.2.2. Cálculos con un calibrador único

La concentración de cada muestra se calcula utilizando la fórmula siguiente:

4.5. MODO COCIENTE

Este modo de análisis requiere el cálculo de la relación entre dos fracciones de una muestra.

4.5.1. Cálculos en el modo cociente

La concentración de la muestra se calcula mediante la fórmula siguiente:  F = Ccalibrador  ∆ _A/min calibrador 

Σ

= C _muestra ∆m Ν  60 t  ·F  ·

Σ

= C _muestra ∆m ·Ccal 

Σ

∆ca l  = C _muestra

Coef ₂· A_TOTAL Coef ₁· A _FRAC   F·

In document TUIs vs. GUIs: comparing the learning benefits for kindergarten children (Page 77-91)