Keck Observations

En relación a los resultados obtenidos en el porcentaje de germinación de

Beauveria bassiana, se observa que en el grupo control hay un mayor porcentaje de

germinación, a 92 ppm de clorantraniliprole hay un porcentaje intermedio de germinación además a 184 y 276 ppm de clorantraniliprole hay un menor porcentaje de germinación, existiendo así diferencia significativa a las concentraciones de 92 ppm, 184 y 276 ppm del insecticida. (Figuras 5 y 6). En el análisis estadístico post-ANAVA- student existe diferencia significativa entre 92 ppm y 184 ppm, 276 ppm respecto al grupo control.

Una posible explicación a estos resultados se basa en el proceso de germinación, el cual puede ser dividido en tres fases: hinchamiento hidrostático de conidias, la aparición del tubo germinal y elongación del tubo germinal.45 El primer paso incluye la conversión de la conidia de reposo, cuya latencia se controla por la presencia interna de bloques metabólicos, las barreras de penetración de nutrientes, propios inhibidores y bajo contenido de agua.46 La segunda fase, cuando el tubo germinativo emerge de la conidia ampliada cuyo crecimiento se produce con el apoyo de la movilización y la utilización de compuestos de almacenamiento en la conidia. Éste paso nos permite diferenciar las esporas que han logrado germinar con las que no lo llegaron a hacer (Fig. 6) En la última fase ocurre la biosíntesis y la extensión de la absorción y el metabolismo de los nutrientes del medio.46

Dados los resultados se puede evidenciar que el insecticida disuelto logró atravesar la pared celular y fueron incorporados como material externo al ingresar a la conidia afectando su germinación.47

La disminución del porcentaje de germinación podría estar sujeta al bloqueo de algún mecanismo metabólico de la conidia, debido a la elevada concentración de moléculas

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de los químicos en la superficie de la membrana, las que probablemente se unan a receptores específicos, alterando la permeabilidad de la membrana citoplasmática.48

Los resultados obtenidos concuerdan con lo reportado por Castiglioni et al.49 que estudiaron la compatibilidad in vitro de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae con Nimkol-L® contra Heterotermes tenuis, detallando que el insecticida presenta efecto inhibitorio sobre la germinación de ambos hongos.

Diferentes autores coinciden en afirmar que se observa efecto fungistático de los insecticidas, cuyo efecto inhibitorio aumenta a través del tiempo de mezcla y puesto que la exposición prolongada in vitro del hongo a formulaciones de insecticidas es determinante; este mismo proceso puede ocurrir en el campo.50,51 Lo cual da a entender que mientras más tiempo lleve en contacto el químico con el hongo, hay la posibilidad en que afecte más la germinación que las 24 horas evaluadas en este trabajo.

En relación a los resultados obtenidos en el porcentaje de crecimiento de

Beauveria bassiana al décimo día de medición, se puede apreciar que no se ve afectado frente

a las concentraciones de clorantraniliprole (Figura 1 y 2); el análisis estadístico post-ANVA- Student presenta a las concentraciones 92, 184, 276 ppm como estadísticamente iguales respecto al control, por lo tanto, no existe diferencia significativa entre los tratamientos (p > 0.05).

Existen dos posibles explicaciones para esta conducta: la primera indica que los hongos, como un mecanismo de resistencia, pueden metabolizar los insecticidas y liberar compuestos que pueden ser usados por el hongo como nutrientes secundarios, y la segunda que, en un medio tóxico, el hongo podría estar haciendo un esfuerzo reproductivo, incrementando la producción de esporas.52

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También se sabe que durante el crecimiento, los hongos cuentan con mayor cantidad de mecanismos de evasión o resistencia a condiciones adversas para su desarrollo; lo que explicaría que los valores de los porcentajes de crecimiento sean altos. Además, dado que el crecimiento fue evaluado en medio de cultivo con nutrientes; los hongos podrían haber obtenido los elementos necesarios para su desarrollo micelial. 53

En un estudio realizado con O,S-dimetil fosforamidotiodato, se observó que hay compatibilidad entre éste insecticida y el controlador biológico Beauveria bassiana,54 además un estudio realizado con Golden Natur´l Oil (insecticida de aceite de soya) muestra que estadísticamente, no hay efecto inhibitorio sobre Beauveria bassiana,47

Por otro lado, estudios realizados con Caldo Sulfocalcico (insecticida de origen natural), dan a conocer que el crecimiento miceliar es más lento, actuando así como fungistático.55

Al determinar el porcentaje de esporulación de Beauveria bassiana a las concentraciones de 0, 92, 184, 276 ppm del insecticida clorantraniliprole, se puede apreciar que no se ve afectado a las diferentes concentraciones del insecticida (Figuras 3 y 4). El análisis estadístico post- ANAVA presenta las concentraciones 92, 184, 276 ppm como estadísticamente iguales, por lo tanto, no existe diferencia significativa entre los tratamientos (p > 0.05).

Se sabe que las sales minerales en general (NaCl, KCl, CaCl2) en una concentración elevada (20 – 70 g/L) inhiben la esporulación. Los iones de sodio y potasio producen una disminuyen de la presión osmótica de las células inhibición la esporulación. Una baja concentración de iones de calcio (1-10 g/L), aumenta la presión osmótica dentro de las células fúngicas induciendo así la esporulación.56 Además, se sabe que las diamidas activan la liberación de calcio intracelular sensible a la rianodina.57-62

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Una posible explicación a estos resultados es que, existen diferencias estructurales que presentan las conidias aun cuando pertenezcan a una misma especie; posiblemente por la variabilidad genética (heterocariosis) que existe entre ellas.63 Una de estas diferencias sería la pared celular, debido a que en algunos casos la pared suele ser más gruesa, evitando que ciertas sustancias del medio externo puedan penetrar o en su defecto que mínimas concentraciones lo hagan; actuando como barrera mecánica.64 Otra sería la constitución o estructura de la membrana citoplásmatica con las propiedades de selectividad y permeabilidad, que confiere protección frente a sustancias tóxicas o nocivas. 48, 65

En cuanto a los resultados obtenido en relación de la capacidad entomopatógena

de B. bassiana, ésta no se vió afectada a las concentraciones de 92 y 184 ppm de

clorantraniliprole, ya que es posible observar los síntomas causado por B. bassiana en larvas

de S. frugiperda como la melanización y momificación de la larva, además el hongo creció

en el tegumento de la larva observándose micelio y su posterior reconocimiento mediante la observación microscópica. Pero a la concentración más alta de 276 ppm de clorantraniliprole, la capacidad entomopatógena de Beauveria bassiana, si se vio afectada, ya que no se observó los síntomas característicos en las larvas de Spodopteras frugiperga, lo que sí se pudo apreciar fue la acción del químico, debido a que se apreciaron los síntomas que son causados por el clorantraniliprole, los cuales fueron, falta de apetito, contracción muscular y falta de movimiento.

El mecanismo de acción para la capacidad entomopatógena de B. bassiana consta principalmente de tres fases: La adhesión de la espora a la cutícula del insecto y su posterior germinación, la penetración del hemocele y la replicación en el hemocele.

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Esto podría deberse a que no afecta o favorece a la concentración de las enzimas que utiliza el hongo para penetrar la cutícula del insecto; entre estas enzimas encontramos proteasas, lipasas y quitinasas, las cuales van a modificar la integridad estructural del insecto, inhibiendo sus procesos selectivos e interfiriendo con su sistema regulatorio. Además, cabe recalcar que las lipasas inician el proceso infectivo, debido a que la cutícula del insecto se compone de ésteres serosos secundarios, triglicéridos, alcoholes y ácidos grasos por lo que según los resultados metamidofos favorece al modo de acción de las lipasas; además la cutícula tiene aminoácidos, y aminoazúcares que van a funcionar como nutrientes para el crecimiento fúngico.67

Además de las enzimas, Beauveria bassiana produce y regula toxinas que posiblemente también no se vea afectada por clorantraniliprole, que al parecer promovería la producción de metabolitos no peptídicos como oospereína y bassianina, y metabolitos peptídicos cíclicos como: beuvericina y beauverolidos.68,69 Las cuales actúan tanto en el sistema circulatorio como en el digestivo; así como en el sistema respiratorio. Para afectar al sistema circulatorio, B. bassiana puede utilizar la hemolinfa como sustrato, la hemolinfa que representa de 10 a 40% del peso de la mayoría de los insectos, en cuanto al sistema digestivo produce problemas tales como regurgitación, diarreas y pérdida de apetito; por otro lado, el sistema respiratorio llega a obstruir los espiráculos del insecto, causando un aumento del consumo de energía para mantener la tasa de respiración. 70-72

Todo este proceso induce a síntomas fisiológicos anormales en el insecto tales como convulsiones, carencia de coordinación, comportamientos alterados y parálisis. La muerte sobreviene por una combinación de efectos que comprenden el daño físico de tejidos, toxicosis, deshidratación de las células por pérdida de fluido y consumo de nutrientes.73

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Cuando los nutrientes provenientes del insecto se van agotando, las conidias retoman su crecimiento micelial.74

Los resultados obtenidos no se asemejan a los encontrados en otros estudios de compatibilidad con Beavueria bassiana en los cuales insecticidas como avermectina y piretroides cuyo estudio realizado por Oliveira et al.75 determinaron que estos insecticidas son compatibles con B. bassiana, así en investigaciones se determinó que el insecticida oxidemetón metil también era compatible con Beauveria bassiana. Además, otros estudios dan a conocer que Beauveria bassiana es compatible con insecticidas como: carbaril, fenvalerate, abamectina, triflumurón y con fenoxicarb. Por otro lado, hay otros que demuestran Beauveria bassiana es compatible también con acaricidas como piridaben, propargita, hexitiazox y azociclotina.76,77

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