Measuring the compositionality of multi-word expressions

Los resultados de antimutagenicidad encontrados con el EAB nos condujeron a preguntarnos si el principal componente de los polifenoles detectados en el EAB, el ácido clorogénico, podría ser uno de los constituyentes presentes en el extracto responsable y/o contribuyente de la antimutagenicidad observada en los experimentos anteriores. Para ello, se evaluó la actividad antimutagénica de diferentes concentraciones de ácido clorogénico utilizando las cepas TA98 y TA100 frente a la mutagenicidad inducida por los mutágenos diagnóstico 2-AF, 2-NF y AZS con y sin activación metabólica. Las concentraciones de ácido clorogénico estudiadas se seleccionaron considerando el valor hallado en el EAB mediante la técnica de HPLC (2,05 mg de ácido clorogénico/ml del EAB) y un valor 5 veces mayor a éste. Por lo tanto, se empleó una concentración de ácido clorogénico de 0,10 mg/placa (concentración contenida en 10mg de EAB) y una concentración 5 veces mayor correspondiente a 0,50 mg/placa.

Se utilizó el método de pre-incubación dado que resultó ser el que presentó mayor sensibilidad en detectar la actividad antimutagénica del EAB.

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En la Tabla 25 se presenta el número de revertantes/placa en las cepas TA98 y TA100 inducidas por los mutágenos 2-AF, 2-NF y AZS en una única concentración de 2,50 g/placa y co-incubado con el ácido clorogénico (0,10 y 0,50 mg/placa) con y sin activación metabólica utilizando el método de pre-incubación.

En la Tabla se incluyen los porcentajes de inhibición %I de la mutagénesis inducida por los mutágenos 2-AF, 2-NF y AZS con y sin activación metabólica cuando se co- incubó con ácido clorogénico.

Para la cepa TA98 el acido clorogénico mostró un efecto inhibidor de la mutagénesis inducida por el 2-AF de 29,0±0,3% y de 84,0±0,1% para 0,10 y 0,50 mg/placa, respectivamente.

El ácido clorogénico en valores de 0,10 y 0,50 mg/placa presentó similar comportamiento en los ensayos sin activación metabólica frente a la mutagénesis inducida por el 2-NF, donde los %I fueron de 44,0±0,7 y 75,5±0,4%, respectivamente.

La capacidad antimutagénica del ácido clorogénico sobre la cepa TA100 frente a la mutagenicidad inducida por 2-AF (con activación metabólica) resultó ser efectiva para ambas concentraciones ensayadas presentando mayor efecto antimutagénico cuando se ensayó la concentración mayor de 0,50 mg/placa (98,9±0,1%).

Al analizar la capacidad antimutagénica del ácido clorogénico frente al mutágeno de acción directa AZS (cepa TA100) no se observó un efecto marcado en los valores del %I según las concentraciones utilizadas 0,10 y 0,50 mg/placa siendo de 36,0±0,3% y 41,0±0,72%, respectivamente.

Lic. María de las Nieves Rodriguez Página 134 Tabla 25.Número de revertantes/placade la cepa TA98 y TA100 inducidas por el 2- AF, 2-NF y AZS co-incubados con el ácido clorogénico (ACL) con y sin activación metabólica empleando el método de pre-incubación. %I de la mutagenicidad inducida por los mutágenos en presencia de 0,10 y 0,50 mg/placa de ACL.

Cepa Mutágeno 2,50 µg/placa Rev/placa mutágeno Rev/placa mutágeno+ACL 0,10 mg/placa) %I ACL 0,10 mg/placa Rev/placa mutágeno+ACL 0,50 mg/placa %I ACL 0,50 mg/placa) TA98 2-AF+S9 2379±431a _1696±125 * _{29,0±0,3 398±37} ** _84,0±0,1 TA98 2-NF 691±62a _330±46 * _{44,0±0,7 192±30} ** _75,5±0,4 TA100 2-AF+S9 2329±140 a _656±58 ** _{76,0±0,2 159±4}** _98,9±0,1 TA100 AZS 2300±280 a _1520±88* _{36,0±0,3 1443±51}* _41,0±0,72 %I: Porcentajes de inhibición del ácido clorogénico frente a la mutagenicidad inducida por 2-NF, 2-NF y AZS. acontrol positivo. Valores en la misma fila con *, p<0,05,**p<0,01 respecto al control positivo

4.4. Análisis comparativo del efecto antimutagénico ejercido por EAB y el acido clorogénico

A efectos de comparar la actividad antimutagénica del EAB y la correspondiente al ácido clorogénico, se evaluaron en forma conjunta los %I sobre la mutagenicidad inducida por los mutágenos diagnóstico.

4.4.1. Ensayo sin activación metabólica

En la Fig. 20 A y B se representa los efectos antimutagénicos ejercidos por el ácido clorogénico (0,10 y 0,50 mg/placa) y el EAB (10,0 mg/placa) en presencia de las cepas TA98 y TA100 , frente a la mutagenicidad inducida por los mutágenos 2-NF y

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AZS (2,50 µg/placa). Para el análisis comparativo se utilizó 0,10 mg/placa de ácido clorogénico, que corresponde a la concentración de este compuesto en la muestra de EAB (10,0 mg/placa) y una segunda concentración de ácido clorogénico 5 veces mayor 0,50 mg/placa, que la contenida en el EAB (10mg/placa), con la finalidad de evaluar la posible diferencia en la respuesta, según las condiciones ensayadas. Para la cepa TA98 (Fig. 20 A) el % I de la mutagenicidad inducida por el 2-NF empleando 0,10 mg/placa de ACL fue de 44,0±0,7% mientras que empleando 10,0 mg/placa de EAB se observó un %I del 81,0±0,7%. Al incrementar la concentración del ácido clorogénico a 0,50 mg/placa, el %I resultó ser de 75,5±0,4%.

Para la cepa TA100 (Fig. 20 B) los % I frente a la mutagenicidad inducida por AZS co- incubado con 0,10 y 0,50 mg/placa de ácido clorogénico fueron de 36,0±0,3 y 41,0±0,72% respectivamente, mientras que el EAB con 10,0 mg/placa presentó un %I del 26,0±2,2%. Estos valores indican que en esta condición, el ácido clorogénico a concentraciones de 0,10 y 0,50 mg/placa, mostró una actividad antimutagénica superior a la ejercida por el EAB 10,0 mg/placa.

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Fig. 19. Efecto antimutagénico del ácido clorogénico (ACL) 0,10 y 0,50 mg/placa (Barras turquesa) y del EAB 10 mg/placa (Barra verde) frente a la mutagenicidad inducida por: A) 2- NF (2,50 µg/placa) utilizando S. typhimurium TA98 sin activación metabólica B) AZS (2,50 µg/placa) S. typhimurium cepa TA 100 sin activación metabólica

4.4.2. Ensayo con activación metabólica

En las Figura 21 A y B se representa los efectos antimutagénicos ejercidos por el ácido clorogénico (0,10 y 0,50 mg/placa) y el EAB (10,0 mg/placa) en presencia de las cepas TA98 y TA100 , frente a la mutagenicidad inducida por el pro -mutágeno. 2-AF, con activación metabólica.

Para la cepa TA98 (Fig. 21 A) los % I de la mutagenicidad inducidas por el 2-AF co- incubado con 0,10 y 0,50 mg/placa de ácido clorogénico fueron de 29,0±0,3 y 84,0±0,1% respectivamente, mientras que con 10,0 mg/placa de EAB se observó un %I del 84±0,9%. Pudo observarse que la capacidad antimutagénica del EAB, resultó semejante a la ejercida por la mayor concentración ensayada de ácido clorogénico 0,50 mg/placa. 44% 75% 81% 0 50 100

0,10 ACL 0,50 ACL 10,0 EAB

P o rc en ta je d e in h ib ic ió n Dosis mg/placa 36% 41% 26% 0 50 100

0,10 ACL 0,50 ACL 10,0 EAB

P o rc en ta je d e in h ib ic ió n Dosis mg/placa B

Cepa TA100 + AZS Cepa TA98 + 2-NF

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Fig. 20. Efecto antimutagénico del ácido clorogénico (ACL) 0,10 y 0,50 mg/placa (Barras turquesa) y del EAB 10,0 mg/placa (Barra verde) frente a la mutagenicidad inducida por el 2-AF (2,50 µg/placa) utilizando la cepa S. typhimurium con activación metabólica. A) cepa TA98, B) cepa TA100

Para la cepa TA100 (Fig.21 B), los % I de la mutagenicidad inducidos por el 2-AF con 0,10 y 0,50 mg/placa de ácido clorogénico fueron de 76,0±0,2 y 98,9±0,1% respectivamente, mientras que con 10,0 mg/placa del EAB %I fue del 99,0±0,1%. Estos valores indicaron que 0,10 mg/placa de ácido clorogénico tuvo una capacidad antimutagénica menor que la ejercida por el EAB 10,0 mg/placa. Sin embargo cuando se incrementó 5 veces la concentración de ácido clorogénico, la capacidad antimutagénica del ácido clorogénico resultó semejante a la ejercida por el EAB.

76%

98,9% 99%

0 50 100

0,10 ACL 0,50 ACL 10,0 EAB

P o rc en ta je d e in h ib ic ió n Dosis mg/placa B 29% 84% 84% 0 50 100

0,10 ACL 0,50 ACL 10,0 EAB

P o rc en ta je d e in h ib ic ió n Dosis mg/placa

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