Non-Parametric Bayesian Methods for SISO systems

La tabla 2 muestra el peso de los quistes (media ± DE) registrado en los diferentes grupos experimentales. No se observó diferencia significativa (P > 0.05) entre los grupos control (Control agua destilada= 9.07±2.46 g; MF= 11.05 ± 5.31). Si bien el tratamiento con ABZ suspensión redujo el peso promedio de los quistes (4.9±2.2 g), no se observaron diferencias significativas con respecto a los grupos control agua destilada y MF (P > 0.05). Por el contrario, el peso de los quistes recuperados de los ratones tratados con los NCABZ fue significativamente menor (2.17±1.24 g) que el obtenido en los 3 grupos control (P < 0.01).

Tabla 2. Estudio de eficacia clínica. Peso (g, media ±DE) de metacestodes recuperados de ratones a las 11 semanas p.i. de ratones de los grupos control, ABZ-SUSP y NCABZ. La administración de las drogas se inició 7 semanas p.i. Los tratamientos se realizaron cada 24 hs durante 30 días a la dosis de 5 mg/kg de ABZ. * P < 0.01, diferencia significativa entre los grupos control (agua destilada, ABZ- SUSP y MF) y NCABZ.

Estudio de eficacia clínica

Peso (g) de los quistes media (±DE) Eficacia (%) Control agua destilada 9,07±2,46

MF 11,05±5,31

ABZ-SUSP 4,9±2.2 45,97

NCABZ 2,17±1,24* 76,07

Los estudios a nivel ultraestructural de los metacestodes recuperados de los grupos control y tratados se muestran en la Figura 8. El daño producido por los NCABZ fue superior que ABZ suspensión. En la capa germinativa de los metacestodes obtenidos del grupo ABZ-SUSP se evidenció una reducción del número de células con morfología intacta, mientras que en los parásitos recuperados del grupo NCABZ sólo se pudieron observar residuos de células (Figuras 8 c y e). Además, el tratamiento con NCABZ provocó la destrucción del tejido interno de la mayoría de los quistes examindos al MET, mientras que con ABZ suspensión el tejido interno se encontró levemente alterado (Figuras 8 d y f).

Figura 8. Imágenes al MEB y MET de quistes recuperados de ratones infectados con E. multilocularis tratados con ABZ suspensión (5 mg/kg) y NCABZ (5 mg/kg) durante el estudio de eficacia clínica. (a y b) Metacestodes recuperados del grupo control. (a) Se observa la capa germinativa con diferentes tipos celulares (MEB 800×). (b) Imagen al MET (10000×). (c y d) Quistes recuperados de ratones del grupo ABZ-SUSP. (c) Notar la disminución del número de células de la capa germinativa (MEB 800×); (d) Metacestode con el tejido interno alterado. Notar la reducción del número de microtriquias (MET 10000×). (e y f) Metacestodes recuperados del grupo NCABZ. (e) Observar la capa germinativa completamente alterada. Sólo se observan residuos de células (MEB 800×); (f) Tejido interno desintegrado y reducción del número de microtriquias (MET 10000×). CG: capa germinativa; CL: capa laminar; TE: tegumento; flechas: microtriquias.

El test de exclusión con azul de metileno reveló un 99% de protoescólices viables en los grupos control (% de vitalidad de MF no mostrados). Ambas formulaciones de ABZ mostraron efecto protoescolicida (Figura 9 A). El tratamiento con ABZ suspensión redujo la vitalidad de los protoescólices (74.65±16.5), no se encontraron diferencias significativas (P< 0.05) respecto de los grupos control. Por el contrario, la administración de NCABZ tuvo un claro efecto protoescolicida, disminuyendo significativamente (P < 0.001) la vitalidad al 34%. Los resultados de vitalidad se correlacionaron con los estudios al MEB (Figura 9B).

Todos los protoescólices del grupo tratado con NCABZ presentaron alteraciones en el tegumento, contracción del soma y desorganización rostelar (Figura 9B c). Las mismas alteraciones se detectaron sólo en algunos protoescólices del grupo ABZ-SUSP (Figura 9B d).

Figura 9. (A) Vitalidad de protoescólices (%, media±DE) extraídos de ratones de los grupos control y

tratados a las 7 semanas p.i. con NCABZ o ABZ suspensión. B) Imagen al MEB de protoescólices extraídos de quistes de ratones infectados con E. multilocularis tratados con ABZ suspensión (5mg/kg) y NCABZ (5 mg/kg). (a y b) Protoescólices aislados del grupo control. (a) Protoescólices brotando (flecha) de la capa germinativa del quiste (230×). b) Protoescólex evaginado (650×). (c) Protoescólex aislado del grupo ABZ-SUSP. Notar la pérdida de ganchos (650×); d. Protoescólex aislado del grupo NCABZ. Pérdida de la morfología característica (650×).

4. Discusión

El incremento en la concentración de saturación y en la velocidad de disolución del F en el medio gástrico provoca un importante gradiente de concentración entre el TGI y los vasos sanguíneos, mejorando su absorción y en consecuencia la disponibilidad plasmática y tisular (Gao y cols., 2008). La importante adhesividad de los NC a la pared intestinal es otra característica que contribuye al incremento de la BD oral, ya que el tiempo de residencia y de contacto de los NC de F en el TGI es

mayor (Gao y cols. 2008). De esta manera el aumento de la eficacia clínica y quimioprofiláctica de ABZ formulado como NC observado en este estudio podría atribuirse al incremento en la Cmáx y el corto período en que ésta se alcanzó (Tmáx) como pudo observarse en los estudios de farmacocinética en ratones.

En los estudios de eficacia quimioprofiláctica, todos los ratones desarrollaron quistes en la cavidad peritoneal. El peso promedio de los metacestodes recuperados del grupo NCABZ fue un 50% menor que el registrado en los grupos control, mientras que el tratamiento con ABZ suspensión no presentó efecto quimioprofiláctico. Las alteraciones ultraestructurales incluyeron la pérdida de la estructura multicelular de la capa germinativa, el incremento del número de vacuolas citoplasmáticas en el tejido interno y la reducción de las reservas de glucógeno de las células. Estos resultados coinciden con las alteraciones observadas en otros estudios de quimioprofiláxis realizados en el modelo de EQ (Urrea-París y cols. 2000, Ceballos y cols. 2010, Ahmadnia y cols. 2013, Pensel y cols. 2014, Maggiore y cols. 2015). Además, la vitalidad de los protoescólices extraídos del grupo NCABZ fue significativamente menor que la de los grupos control. Un efecto deletéreo del F sobre el estadio larval en el momento de la infección, explicaría el desarrollo de quistes y protoescólices aberrantes.

Con respecto a los estudios de eficacia clínica, ambas formulaciones de ABZ provocaron una reducción en el peso medio de los quistes obtenidos de los ratones; sin embargo, sólo el tratamiento con los NCABZ reveló diferencias significativas con los grupos control. Los estudios ultraestructurales mostraron un claro efecto de los NCABZ en la capa germinativa de los metacestodes. Por otro lado, la vitalidad de los protoescólices determinada en cada grupo tuvo una correlación con el peso promedio de los quistes detectados en los mismos. La cantidad y el tiempo de permanencia del F en los metacestodes obtenidos del grupo NCABZ (5 mg/kg) fueron lo suficientemente altos para reducir el peso de los quistes un 77% y la vitalidad de sus protoescólices un 34%. Por su parte, el tratamiento con la suspensión de ABZ a pesar de administrarse a la misma dosis, no produjo un efecto significativo sobre el peso de los quistes y la vitalidad de los protoescólices.

5. Conclusiones

En los capítulos previos se pudo diseñar, obtener y caracterizar NC redispersables que presentaron una mejora marcada en la velocidad de disolución con respecto al F puro y una consiguiente mejora en los parámetros farmacocinéticos. En base a eso se diseñaron los estudios propuestos en este capítulo para determinar en un modelo murino de parasitosis, si las ventajas antes mencionadas se correlacionaban con una potencial mejora terapéutica.

La disminución en la viabilidad de los protoescólices y las observaciones realizadas por microscopía electrónica que evidenciaron el daño producido a nivel ultraestructural y morfológico de los parásitos, permitieron demostrar que los NCABZ produjeron un aumento significativo de la eficacia quimioprofiláctica y clínica del F.

En este sentido, la estrategia de nanometrización de ABZ puede traer claras ventajas terapéuticas y por lo tanto ser una alternativa a corto plazo en el diseño de nuevos medicamentos para el tratamiento de pacientes con hidatidosis.

6. Referencias

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Capítulo IV. Ensayo de eficacia clínica en