Protocol Logic

Los extractos de los jarabes de agave presentaron actividad inhibitoria de la liberación de glucosa en ambos tratamientos enzimáticos (Tabla 4.8). Los resultados obtenidos en las muestras tratadas con invertasa muestran diferencias significativas entre los diferentes extractos, debido a la influencia del tipo de jarabe (p=0.010), no así por el disolvente utilizado

(p=0.823) o la interacción entre ambos factores (p=0.343). El extracto metanólico del jarabe

Nazario presentó el valor más alto de inhibición de liberación de glucosa.

El porcentaje de inhibición de glucosa liberada en las muestras tratadas con amiloglucosidasa fue mayor en el jarabe Nazario (p=0.007). No se observó un efecto

significativo sobre la inhibición de glucosa liberada en función de la interacción entre el tipo de jarabe y el disolvente empleado para obtener el extracto (p=0.068), pero en el caso de los

GLUT-2 Glucosa Glucosa Glucosa-6 fosfato Glucoquinasa Oxidación ATP cerrado Canal de potasio - ATP abierto Canal de calcio Despolarización K+ K+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+

Vesículas con insulina

Insulina Citosol Membrana celular Exocitosis Fluido extracelular Mimex-M Mimex-M ?? Célula β

55 jarabes Nazario e Ingenio la inhibición alcanzada por los extractos metanólicos fue más de 50% superior a la obtenida con los extractos acetónicos (p=0.040).

Tabla 4.8: Efecto de los extractos de jarabes de agave sobre la liberación de glucosa

Extractos (40mg/mL) A: acetona, M: metanol y acetato de etilo. Diferentes letras capitales indican diferencias estadísticamente significativas entre las medias.

El porcentaje de inhibición en el tratamiento con amiloglucosidasa presentado por el extracto Nazario-M (42.74 ± 3.06%) es comparable al presentado sobre la enzima α-amilasa por el extracto de orégano (Origanum vulgare L.) con 7% de ácido rosmárinico (42% de

inhibición) a una concentración de 3.33mg/mL (McCue y Shetty, 2004) y por el extracto de

Dangyuja (48.15% de inhibición) a una concentración de 0.5mg/mL, rico en flavononas con

formas hidroxiladas (estructura 5,6,7-trihidroxiflavonona) (Gyo-Nam et al., 2009). Sin

embargo, es menor al presentado por el ácido rosmarínico grado reactivo (85% de inhibición) a una concentración de 3.33mg/mL (McCue y Shetty, 2004). El extracto de Dangyuja también

presenta un porcentaje de inhibición sobre la enzima α-glucosidasa (27.43%) a una concentración de 0.5mg/mL similar al presentado por el extracto metanólico del jarabe Nazario (28.27 ± 2.96) sobre la liberación de glucosa en el tratamiento enzimático con invertasa (Gyo-Nam et al., 2009).

Tratamiento enzimático Muestra % Inhibición

Invertasa Mimex-A 25.45 ±1.44 ab Mimex-M 22.96 ±1.13 ab Nazario-A 25.51 ±1.40 ab Nazario-M 28.27 ±2.96 a Ingenio-A 19.65 ±1.67 ab Ingenio-M 18.40 ±0.82 b Amiloglucosidasa Mimex-A 24.80 ±2.84 b Mimex-M 21.19 ±4.11 b Nazario-A 29.08 ±0.13 ab Nazario-M 42.74 ±3.06 a Ingenio-A 17.73 ±1.95 b Ingenio-M 27.22 ±4.22 ab

56 Existe evidencia de que la actividad de las enzimas que hidrolizan los enlaces glucosídicos α (1-4) del almidón en glucosa, como amiloglucosidasa y α-amilasa, así como la actividad de las enzimas que hidrolizan disacáridos, como invertasa y α-glucosidasa, disminuye al interactuar con compuestos fenólicos, y ésta correlación depende de la concentración y del número y posición de moléculas hidroxilo del compuesto fenólico (Rohn et al., 2002; Gyo-

Nam et al., 2009). En la investigación llevada a cabo por Rohn et al. (2002), sobre la

inhibición de la actividad enzimática de α-amilasa, tripsina y lisozima por compuestos fenólicos, se demostró que los compuestos con mayor efecto sobre las enzimas α-amilasa, tripsina fueron p-benzoquinona, ácido gálico, ácido caféico y ácido clorogénico, éste último fue el único identificado como inhibidor de la lisozima. El ácido gálico fue identificado en los extractos de jarabes aquí analizados, sin embargo no es el compuesto que demostró mayor actividad inhibitoria. El compuesto fenólico predominante en los cromatogramas del extracto metanólico del jarabe Nazario fue JA-2, presumiblemente se trata de 5,7-dihidroxi-4´-metoxi homoisoflavona, el cual posee una dihiroxiquinona que podría relacionarse con la reducción de la actividad de la enzimas invertasa y amiloglucosidasa de liberar glucosa de los controles, pero su contenido en este extracto fue 3 veces menor al contenido en el extracto acetónico del mismo jarabe. Por otro lado, el pico JA-13 identificado solamente en el extracto metanólico del jarabe Nazario, también podría estar relacionado con el efecto inhibitorio significativo, sin embargo no es posible determinar la naturaleza de los compuestos presentes en este pico. De acuerdo a lo anterior solamente es posible sugerir que el efecto antidiabético de este extracto posiblemente correspondió a la actividad sinérgica de moléculas hidroxiflavonas presentes en el extracto obtenido con la mezcla de metanol y acetato de etilo del jarabe Nazario, y que este contenido fitoquímico responde al genotipo de las variedades Cuerudo, Blanco Cenizo y Verde Mexicano del A. atrovirens Karw, utilizados para la elaboración del jarabe.

El efecto inhibitorio de los extractos de los jarabes de agave sobre la actividad de las enzimas digestivas invertasa y amiloglucosidasa no fue comparado con algún tratamiento antidiabético utilizado en pacientes diabéticos, como acarbosa o miglitol, por lo cual se sugiere su inclusión en estudios posteriores. Sin embargo, la hidrólisis de los hidratos de carbono es llevada a cabo por las enzimas digestivas en el tracto gastrointestinal donde la mayoría de los polisacáridos son convertidos a disacáridos o monosacáridos antes de atravesar el duodeno (intestino delgado) para ser absorbidos como monosacáridos. En la figura 4.8 se

57 plantea el posible mecanismo de inhibición enzimática llevada a cabo por los extractos nutracéuticos evaluados en la presente investigación.

Figura 4.8: Mecanismo posible de los extractos nutracéuticos con efecto inhibitorio de las enzimas digestivas. Nazario-M: extracto metanólico del jarabe Nazario con mayor porcentaje inhibitorio.

Finalmente el efecto del extracto metanólico del jarabe Nazario sobre la actividad de las enzimas digestivas aquí evaluadas disminuye la liberación de glucosa de los alimentos ricos en hidratos de carbono, lo cual se traduce en la disminución del índice glucémico de éstos.

Lumen del tracto gastrointestinal Almidón Amiloglucosidasa Sacarosa Invertasa Nazario-M 28% inhibición Invertasa Nazario-M 28% inhibición Glucosa Disacáridos Glucosa Enterocito

Intestino Delgado

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