Representativeness of the Sample

Al iniciar un estudio fitoquímico es necesario considerar qué tipo de metabolitos es posible determinar en la especie a estudiar, y de manera más específica la parte de la planta de la que se realizará la extracción. La correcta selección de estos factores será importante al momento de seleccionar el método de extracción. Una extracción realizada con material seco y pulverizado permite una mayor permeabilidad del solvente y de este modo existe un mayor rendimiento en la extracción.

sin embargo, en algunos estudios como aquellos relacionados con aromas consideran la absoluta necesidad de la utilización de material vegetal fresco. La polaridad de las sustancias a extraer determina el tipo de solvente, por ende, si se desean extraer mayoritariamente compuestos como esteroles, se requerirá utilizar un solvente como éter de petróleo; el hexano permite una extracción de las cumarinas y para los alcaloides primero se emplea alcohol etílico y posteriormente un ácido diluido. El etanol es un solvente muy utilizado, permitiendo la extracción de sustancias de todas las polaridades, además resulta estable (poco reactivo), se evapora fácilmente y no es caro (33)

1.4.1. Extracción sólido-líquido

Es extraer un componente sólido con el contacto de un disolvente, en fitoquímica la fase portadora sólida sería el material vegetal, y el producto de esta extracción conocido como soluto sería el extracto resultante de este disolvente (33)

1.4.2. Maceración

Se obtienen extractos gracias a un amplio tiempo de contacto que el solvente debe tener con el material vegetal, el cual debe estar pulverizado o molido para lograr una mayor superficie de contacto con el solvente, todo esto a temperatura ambiente. Las agitaciones son recomendables para la homogenización del producto y de este modo influenciar el rendimiento de la extracción; el poder de extracción del solvente se reducirá al pasar el tiempo de contacto con el material vegetal; para este tipo de extractos es útil la protección del recipiente de extracción de la luz solar, debido a la descomposición de sustancias fotolábiles. Después de la filtración se requiere lavar el material vegetal restante con más solvente para la obtención del extracto total (33)

1.4.3. Percolación o lixiviación

El disolvente pasa a temperatura ambiente por gravedad sin necesidad de presión a través del material vegetal finamente molido, el paso

detenido del solvente por las partículas del sólido hace que disuelvan la mayor cantidad de metabolitos que sean posibles y por la continua la adición de solvente se logra una alta efectividad

1.4.4. Extracción líquido-líquido

La extracción líquido-líquido se basa en la transferencia de una o varias sustancias desde una fase líquida a otra líquida que no puede mezclarse con la primera sustancia. Esto sucede por el reparto entre las dos fases de compuestos de diversas polaridades. Una fase suele ser acuosa y la otra conocida llamada extractarte es orgánica, esta última es la que transfiere los compuestos.

1.4.5. Compuestos fenólicos

Los compuestos fenólicos, entre los cuales se encuentran los flavonoides, presentan una amplia ubicuidad en la naturaleza. Son responsables del buen funcionamiento de las plantas y, en su relación con el hombre, son utilizados para tratar desordenes cardiovasculares y prevenir algunos cánceres. Poseen una estructura química adecuada para ejercer actividad antioxidante, la cual está íntimamente relacionada con tales propiedades. Para su extracción se utilizan solventes polares cuyo extracto posteriormente se concentra. Los compuestos fenólicos constituyen una de las principales clases de metabolitos secundarios de los vegetales, donde desempeñan diversas funciones fisiológicas

Los flavonoides, uno de los dos grandes grupos de compuestos fenólicos junto con los ácidos fenólicos, son un grupo extenso de compuestos derivados del benzo-γ-pirano. Dependiendo del grado de oxidación y de sustitución del anillo pirano central pueden subdividirse en flavonas, flavonoles, flavononas, isoflavonas, flavanos y antocianinas. Está comprobado que los flavonoides son importantes para el desarrollo y buen funcionamiento de las plantas al protegerlas contra agentes agresores externos, como la radiación UV, microorganismos, animales herbívoros y del medio ambiente (34)

1.4.5.1. Análisis de fenoles totales.

La concentración de fenoles totales en extractos fue medida por espectrofotometría, basándose en una reacción colorimétrica de óxido- reducción. El agente oxidante utilizado fue el reactivo de Folin-Ciocalteu (38).

El ensayo Folin-Ciocalteu se utiliza como medida del contenido en compuestos fenólicos totales en productos vegetales. Se basa en que los compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH básico, dando lugar a una coloración azul susceptible de ser determinada espectrofotométricamente a 765 nm. Este reactivo contiene una mezcla de wolframato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico, y reacciona con los compuestos fenólicos presentes en la muestra. El ácido fosfomolibdotúngstico (formado por las dos sales en el medio ácido), de color amarillo, al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso (35)

El mecanismo de reacción es una reacción redox, por lo que además puede considerarse también, como un método de medida de la actividad antioxidante total. La oxidación de los polifenoles presentes en la muestra, causa la aparición de una coloración azulada que presenta un máximo de absorción a 765 nm, y que se cuantifica por espectrofotometría en base a una recta patrón de ácido gálico (35)

1.4.5.2. Tamizaje fitoquímico

Con el propósito de sintetizar la amplia información referente al tamizaje fitoquímico se ha elaborado la Tabla 4 que resumen los distintos métodos que se emplean para la citada técnica.