Selection of research method

Con el fin de evaluar el posible efecto neuroprotector del cannabinoide sintético HU210 sobre la función de la retina de ratas P23H, se obtuvieron los registros electrorretinográficos de ratas P23H tratadas con HU210 de P24 hasta P90 (n = 6), y se compararon con los resultados obtenidos con el grupo P23H tratado con vehículo (n = 5). Todos los registros fueron llevados a cabo en condiciones escotópicas a las edades de P30, P60 y P90.

Los resultados obtenidos son mostrados en la Figura 37, a través de los registros electrorretinográficos representativos de una rata P23H tratada con vehículo y de una rata P23H tratada con HU210 (panel A). Los paneles B, C y D muestran las curvas estímulo- respuesta resultantes de la cuantificación de la amplitud de las ondas a y b frente a estímulos de intensidad creciente en las ratas de P23H tratadas con vehículo y en las tratadas con HU210.

Como se muestra en la (Figura 37, panel A), la respuesta electrorretinográfica fue menos deteriorada en las ratas P23H tratadas con HU210, en comparación con las ratas P23H tratadas con vehículo. En los ERGs realizados a P30, con una semana de tratamiento en los animales tratados con HU210, se observó una mayor amplitud en la onda b registrada en condiciones escotópicas (427 ± 19 μV), en comparación con lo observado en las ratas P23H tratadas con vehículo (371.2 ± 19.5 μV) (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.001), mientras que la onda a permaneció prácticamente sin variaciones (Tabla 7).

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Figura 37. Electrorretinogramas y curvas estímulo-respuesta de ratas P23H

A) ERGs representativos registrados en condiciones escotópicas en una rata P23H tratada con vehículo (P23H) y otra tratada con HU210 (P23H + HU210) a P30, P60 y P90. (B-D) Curvas estímulo-respuesta de la amplitud de las ondas a y b en función de la luminancia aplicada en condiciones escotópicas en ratas P23H tratadas con vehículo (n = 5) y P23H tratadas con HU210 (n = 6). (B) corresponde a P30, (C) corresponde a P60 y (D) corresponde a P90. ANOVA, test de Bonferroni, *p < 0.05 **p < 0.01.

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A P60, en las ratas P23H tratadas con HU210 se observó una mejora significativa en la amplitud de las ondas a (15 ± 1.1 μV) y b (248.1 ± 14.4 μV) en comparación con las ratas P23H tratadas con vehículo (onda a: 12.4 ± 1.1 μV y onda b: 205.1 ± 15.3μV) (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.001) (Figura 37, Tabla 7).

ERG Escotópico Escotópico

Onda a b

Tiempo P30 P60 P90 P30 P60 P90

HU210 36.3 ± 5.3 15 ± 1.1 12.5 ± 2 427 ± 19 248.1 ± 14.4 132.1 ± 15.7 P23H 36 ± 5.3 12.4 ± 1.1 6.9 ± 1.9 371.2 ± 19.5 205.1 ± 15.3 77.5 ± 9.6

Tabla 7. Amplitud máxima de la onda a y b de los ERGs registrados en condiciones escotópicas de ratas P23H tratadas con vehículo y ratas tratadas con HU210

Se indica el promedio de la amplitud máxima ± EEM (μV) de la onda a y b de 5 ratas P23H tratadas con vehículo y de 6 ratas tratadas con HU210.

A P90, en las ratas P23H tratadas con HU210 se observó una mayor amplitud de las ondas a (12.5 ± 2 μV) y b (132.1 ± 15.7 μV) en comparación con las ratas P23H tratadas con vehículo (onda a: 6.9 ± 1.9 μV y onda b: 77.5 ± 9.6 μV) (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.001).

La amplitud máxima registrada en las ondas a obtenidas bajo condiciones escotópicas a P60 y P90 fue mayor en los animales P23H tratados con HU210 en comparación con la registrada en los animales P23H tratados con vehículo (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0,05 en ambos casos) (Figura 37. A, C, D). Además, la amplitud máxima registrada en las ondas b fue mayor en ratas P23H tratadas con HU210, en comparación con las ratas P23H tratadas con vehículo, a P30, P60 y P90 (ANOVA, test Bonferroni, p < 0,001 en todos los casos; Figura 37 A, B, C y D). Las mayores diferencias en la amplitud de la onda a y b entre el grupo HU210 y el grupo P23H tratado con vehículo se observaron a P90, cuando la diferencia de amplitud registrada del grupo HU210 en términos de porcentaje de la onda a (máxima) y onda b (máxima) resultaron,

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respectivamente, un 71% y 70% superior a las registradas en los animales P23H tratados con vehículo.

La RP en humanos muestra típicamente la reducción de las ondas a y b (Cuenca, Pinilla et al. 2004, Cuenca, Fernandez-Sanchez et al. 2014). Nuestros resultados indican que HU210 protege y conserva la función de las vías de transmisión de la fototransducción a nivel retiniano.

Los umbrales de sensibilidad a la luz en los animales P23H tratados con HU210, en comparación con las ratas P23H tratadas con vehículo, fueron menores para la onda b en condiciones escotópicas a P60 y a P90 (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.05) en comparación con los resultados del grupo tratado con vehículo. En cuanto a la onda a no fueron detectables diferencias significativas de umbrales de sensibilidad (Tabla 8).

ERG Escotópico Escotópico

Onda a b

Tiempo P30 P60 P90 P30 P60 P90

P23H -2.08 ± 0.13 -0.85 ± 0.25 -0.25 ± 0.16 -5 ± 0.9 -4.3 ± 0.2 -4.9 ± 0.3

HU210 -1.9± 0.15 -1.4 ± 0.2 -0.8 ± 0.2 -4.89 ± 0.19 -4.8 ± 0.2 -5.37 ± 0.22

Tabla 8. Umbrales de sensibilidad de las onda a y b escotópicas a diferentes edades de ratas P23H

Se indica el umbral de sensibilidad ± EEM (log cd s m-2_{) promedio de las ondas a y b de 5 ratas P23H tratadas}

con vehículo y 6 ratas tratadas con HU210. Se puede notar cómo el umbral de sensibilidad aumenta con el avance de la edad.

El tiempo implícito o, también, latencia media de la onda a y onda b fue menor a P60 en las ratas tratadas con HU210, en comparación con las ratas del grupo de P23H tratado con vehículo (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.01 en ambos casos). Los resultados fueron los siguientes: en el grupo tratado con HU210 el tiempo implícito de la onda a resultó ser 26.0 ± 0,6 ms en comparación con los 29.9 ± 1.3 ms del grupo tratado con vehículo, y el tiempo

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implícito de la onda b en el grupo tratado con HU210 resultó ser 61.3 ± 1.5 ms en comparación con los 66.4 ± 1.2 ms del grupo tratado con vehículo. A P90, las diferencias en el tiempo implícito se confirmaron (ANOVA, test de Bonferroni, p < 0.01 en ambos casos). El tiempo implícito de la onda a en el grupo tratado con HU210 resultó ser de 23.0 ± 1.0 ms en comparación con los 29.7 ± 2.1 ms del grupo tratado con vehículo. El tiempo implícito de la onda b resultó ser en el grupo tratado con HU210 de 64.2 ± 3.0 ms en comparación con los 71.9 ± 3.2 ms del grupo tratado con vehículo (Tabla 9).

ERG Escotópico Escotópico

Onda a b

Tiempo P30 P60 P90 P30 P60 P90

HU210 24.5 ± 0.4 26.0 ± 0.6 23.0 ± 1.0 57.8 ± 0.7 61.3 ± 1.5 64.2 ± 3.0

P23H 24.9 ± 0.4 29.9 ± 1.3 29.7 ± 2.1 57.6 ± 1.3 66.4 ± 1.2 71.9 ± 3.2

Tabla 9. Tiempo implícito o latencia media (ms) de la onda a y b escotópicas en ratas P23H tratadas con

vehículo y tratadas con HU210

Se indica el tiempo implícito ± EEM promedio de la onda a y b de 5 ratas P23H tratadas con vehículo y 6 ratas tratadas con HU210.

El tiempo implícito con el que se disparan las ondas de los ERGs refleja el estado morfológico y funcional de las vías de fototransducción a nivel retiniano. En los pacientes con RP las ondas que componen el ERG se reducen a la vez que aumenta el tiempo implícito, debido al surgir de problemas sinápticos de transmisión de la señal. Nuestros resultados muestran una mejora en el tiempo implícito de las ondas a y b de los ERGs registrados en animales P23H tratados con HU210, lo que podría indicar una acción protectora y de preservación de las células retinianas y de las conexiones sinápticas.

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