Sign Maintenance Method Analysis

Tiras reactivas y métodos túrbido-métricos

La tira reactiva es una banda angosta de plástico con pequeños tacos adheridos, que contienen un reactivo diferente para cada determinación, lo que permite la evaluación simultánea de varias pruebas. Un requerimiento crítico es que las reacciones de las tiras sean leídas en el momento indicado después de haber sido sumergidas en la muestra, y

luego deben ser comparadas cuidadosamente con la carta de colores proporcionada por el fabricante.

La utilización de tiras reactivas permite la detección de diversos elementos que pueden ocasionalmente estar presentes en la orina, siendo su uso de fácil realización, bajo costo y resultados inmediatos. Se trata de la determinación semicuantitativa de proteínas, glucosa, hemoglobina, mioglobina, leucocitos nitritos, cuerpos cetónicos, bilirrubina, urobilinogeno así como la verificación de Ph y densidad.

La detección de proteínas por este medio, permite estimar el grado de albuminuria según la escala cromática que acompaña al frasco y que varía entre 1+ (que corresponde aproximadamente a 30 mg/dl) y 4+ (>2000 mg/dl). El método es relativamente insensible a las globulinas. Orinas alcalinas (Ph 8) pueden producir falsos positivos, al igual que la Fenozopiridina y la contaminación con antisépticos como la Clorohexidina y algunos detergentes utilizados en la limpieza del material de vidrio. Asimismo, orinas diluidas pueden dar falsos negativos.

Parámetros de las tiras reactivas:

➢ Urobilinógeno: la prueba está basada en la reacción de unión de una sal de diazonio con el urobilinógeno urinario en un medio ácido. El color vira del rosa pálido al rosa intenso.

➢ Glucosa: reacción enzimática secuencial donde la glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la glucosa dando ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. Luego, la peroxidasa cataliza la reacción del peróxido de hidrógeno con ioduro de potasio, formándose productos coloreados que van desde celeste verdoso, pasando por marrón verdoso intermedio, a marrón.

➢ Cetonas: se basa en la reacción de ácido acetoacético de la orina con nitroprusiato. El color resultante va desde tostado, cuando no hay reacción, a distintos tonos de púrpura para reacciones positivas.

➢ Bilirrubina: se basa en la unión de la bilirrubina con la sal de diazonio del 2,4- diclorofenilo en un medio fuertemente ácido. El color cambia de tostado suave a tostado intenso.

➢ Proteínas: basada en el cambio de color del indicador, azul de tetrabromofenol, en presencia de proteínas. Una reacción positiva está indicada por un cambio de color del amarillo verdoso al verde, y luego al verde intenso.

➢ Nitrito: esta prueba está basada en la reacción de ácido p-arsanílico y nitrito, derivado del nitrato de la dieta en presencia de bacterias de la orina, para formar un compuesto de diazonio. Este compuesto reacciona con N-(1-naftil) etilendiamina en un medio ácido. El color resultante es rosa. Cualquier tonalidad rosada es considerada positiva.

➢ pH: esta prueba está basada en indicadores dobles (rojo de metilo y azul de bromotimol) los cuales dan un amplio espectro de colores cubriendo el rango de pH urinario completo. Los colores varían desde ocre, pasando por verdoso- amarillento, a verde azulado.

➢ Sangre: esta prueba está basada en la actividad de pseudo peroxidasa de la hemoglobina, la cual cataliza la reacción de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina con hidroperóxido orgánico tamponado. El color resultante varía desde verdoso- amarillento, pasando por verde azulado, hasta azul oscuro.

➢ Densidad: basado en el cambio de pKa. En presencia de los cationes urinarios, se liberan protones de un polielectrolito produciéndose un cambio de color en el indicador azul de bromotimol desde azul a amarillo

➢ Leucocitos: esta prueba revela la presencia de esterasas granulocitarias. Las esterasas escinden un derivado del éster pirazol aminoácido para liberar un derivado de hidroxipirazol que luego con la sal de diazonio determina un producto violeta.

➢ Ácido ascórbico: esta prueba está basada en el efecto reductor del ácido ascórbico. Comprende un compuesto aromático coloreado en su estado oxidado, que se decolora cuando es reducido por el ácido ascórbico. El color cambia del verde intenso al amarillo verdoso.

Otra forma semicuantitativa de estudiar la proteinuria son los métodos túrbido-métricos, los cuales consisten en medir la turbidez que desarrollan las proteínas de la orina al precipitar con ácido sulfosalicílico, ácido nítrico, ácido tricloroacetico o ácido acético con calor.

La turbidometría se realiza por fotometría o nefelometría. Estos métodos son más sensibles que las cintas colorimétricas y detectan 5 mg/dl de proteína. Además, detectan todas las proteínas, y por esta razón, un resultado negativo con la cinta y positivo con un método túrbido métrico, indica la excreción urinaria de proteínas diferentes a la albúmina. Cuando esto sucede debe estudiarse la posibilidad de proteinuria de Bence- Jones (cadenas ligeras de inmunoglobulinas), la cual se asocia con Mieloma o de Lisozimuria que acompaña en ocasiones a las Leucemias Mielociticas. Falsos positivos pueden ocurrir en orinas muy concentradas y cuando hay excreción urinaria de medios yodados de contraste radiológico, metabolitos de la Tolbutamida y Sulfas o bien concentraciones altas de Penicilina o Cefalosporinas en la orina.

Otros métodos para determinar proteinuria son de uso menos frecuente en la práctica clínica. Entre ellos está el método de Biuret y el Folin/Lowry, que utilizan la fijación de proteínas por el cobre y cuantifican espectrofotométricamente los cambios de color que dicha reacción produce.

Finalmente está la técnica de Kjeldahl que determina el nitrógeno resultante de la digestión de la proteína, después de eliminar otros compuestos nitrogenados no- proteicos. Esta última técnica es la más precisa y es usada como referencia para los demás métodos, pero tiene como desventaja que toma mucho tiempo y es costosa.