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La investigación se realizó en los laboratorios de Unidad de Investigación en Granos y Semillas (UNIGRAS) de la Facultad de Estudios Superiores (FES) plantel Cuautitlán en el Estado de México.

84 SEMILLAS. Se trabajó con doce lotes de semillas de lechuga (Figura

3.6), correspondientes a diez variedades botánicas diferentes (Tabla 3.2). Las semillas se obtuvieron en la Zona Metropolitana del Valle de México (ZMVM) particularmente en el municipio de Tlalnepantla, y en las delegaciones Xochimilco, Cuauhtémoc e Iztapalapa de la Ciudad de México. Cada lote fue sometido a las pruebas de germinación y calidad sanitaria que se describen a continuación.

Tabla 3.2 Clasificación de lotes de semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

NÚMERO DE LOTE VARIEDAD PROCEDENCIA

1 1.- BABY ROMANA HY TLALNEPANTLA

2 2.- VULCANO TLALNEPANTLA

3 3.- ICEBERG TLALNEPANTLA

4 4.- BATAVIA IZTAPALAPA

5 5.- SIMPSON HY TLALNEPANTLA

6 6.- BABY ITALIANA TLALNEPANTLA

7 7.- OREJONA PARRIS TLALNEPANTLA

8 8.- OREJONA ROJA TLALNEPANTLA

9 9.- ROMANA V. CLIMAX IZTAPALAPA

10 10.- BLACK SIMPSON CUAUHTÉMOC

11 11.- GREAT LAKES CUAUHTÉMOC

12 12.- VULCANO UNAM XOCHIMILCO

PRUEBA DE GERMINACIÓN. Las semillas seleccionadas se dispusieron en bloques completos al azar con 4 repeticiones de 50 semillas por unidad experimental. Se requirió papel absorbente grueso (papel tipo anchor) que al estar húmedo no se dobla y se mantiene firme. La hoja de papel 38 x 25 cm se cortó por la mitad en su parte más grande (38 cm), obteniendo 2 partes las cuales se doblan en su parte más grande (25 cm) obteniendo un rectángulo de 19 x 12.5 cm; en una cara, iniciando en la parte del doblez, se marcó una línea de 1 cm en su eje de 25 cm e igualmente se marcaron 5 líneas paralelas más hacia abajo. Sobre la línea que quedó al centro de la hoja se pegó cinta adhesiva de doble cara marca 3M y se colocaron las 50 semillas de lechuga en forma equidistante. Las semillas quedaron con la plúmula apuntando hacia arriba, en ángulos rectos respecto a las líneas horizontales. Las semillas se cubrieron con una hoja del mismo tamaño y mismo papel, quedando 3 hojas por repetición.

Una vez que las semillas quedaron cubiertas se procedió a enrollarlas en forma de rollo en sentido perpendicular a las líneas horizontales, para posteriormente humedecerlas con agua. Los rollos humedecidos se colocaron en una bolsa plástica, quedando al final 4 bolsas con 12 rollos

Figura 3.6 Semilla de Lechuga (Lactuca sativa) (Elaboración propia, 2012)

85 por bolsa siendo las doce variedades de semilla. Las bolsas se colocaron en enfriamiento a 10°C por 48 h, para romper la dormancia de las semillas (ISTA, 2010), en un refrigerador comercial vertical, marca Nieto modelo REB800 de 1084.45 litros de capacidad. Posteriormente cumplido el enfriamiento, las bolsas con los rollos son colocadas en una incubadora Precision scientific modelo 815, a 20°C por 7 días para su germinación (ISTA, 2010). El primer conteo se realizó al cuarto día como lo recomienda ISTA; el criterio de germinación fue la ruptura de la semilla y la aparición de la radícula, con longitud igual a 2 mm; se contó también el número de plántulas, considerando como plántula aquellas que presentaban más de 5 mm de hipocótilo. Se finalizó con un segundo conteo el séptimo día, donde se contaron las plántulas normales (aquellas que presentaron una longitud de hipocótilo de 1 cm o más, libres de manchas necróticas), se midió la longitud de hipocótilo de las plántulas normales, se contaron las plántulas anormales, se contaron las semillas muertas (aquellas que no presentaron germinación pero con bastante humedad) y las semillas duras (Figura 3.7).

Figura 3.7 Proceso para la evaluación de la calidad fisiológica de la semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

86 Se calculó el porcentaje de germinación de los lotes, considerando el número total de plántulas normales con respecto al total del lote. Se realizó también el cálculo de la longitud media de la hipocótilo por lote de semillas, como un indicador del vigor de la misma, donde a mayor longitud representa un mayor vigor, de acuerdo a la siguiente fórmula (Moreno, 1983):

En donde: L = Longitud media de hipocótilo

t = total de semillas usadas para el cálculo n = número de hipocótilos de longitud x

x1 a xn = distancia en cm desde la línea central (1, 2, 3, 4, 5)

PRUEBA DE CALIDAD SANITARIA. En esta prueba se determinó el tipo de hongos presentes en los lotes de semilla, a través de placas de agar. Las semillas seleccionadas se dispusieron en bloques completos al azar de 4 repeticiones de 25 semillas por unidad experimental. Los medios de cultivo utilizados para el desarrollo de micobiota fueron el PDA (Agar Papa Dextrosa) y MSA (Agar Malta Sal), con el fin de aislar hongos de campo y almacén, respectivamente. El cultivo en PDA se preparó con 39g de polvo, Agar Dextrosa y Papa marca Bioxon, por litro de agua destilada; para elaborar el cultivo MSA se usó 20g de malta, 20g de agar y 60g de NaCl, por litro de agua destilada. Los medios se esterilizaron por 20 minutos a 15 lb de presión en una autoclave famsa.

Posteriormente se realizó el vaciado de los medios de cultivo en caja s Petri, en una campana de flujo laminar, para evitar la contaminación de los medios. Una vez vaciados los medios en las cajas Petri, se llevan a refrigeración por 72 h a 5°C en un refrigerador comercial vertical, marca Nieto modelo REB800 de 1084.45 litros de capacidad. Transcurrido el tiempo de refrigeración se procedió a la siembra de las semillas seleccionadas en una campana de flujo laminar, a manera de mantener lo más estéril posible el proceso de siembra; se colocaron 25 semillas por caja Petri, usando 4 repeticiones por lote de semillas.

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Figura 3.8 Proceso para la evaluación de la calidad sanitaria de la semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

Finalizada la siembra y etiquetado de las cajas, se colocaron éstas en una incubadora marca Precision scientific modelo 815, por 7 días a 25°C, y se realizó un primer conteo al cuarto día y se terminó con un segundo conteo al séptimo día de la micobiota desarrollada en los cultivos (Figura 3.8).

Los datos obtenidos se sometieron a un análisis de varianza utilizando el procedimiento GLM de SAS (SAS, versión de 2002). Posteriormente, se les aplico el procedimiento de diferencias altamente significativas (Tukey) con un nivel de error menor al 5% (α < 0.05).

3.1.4.5 RESULTADOS

PRUEBA DE GERMINACIÓN. Se encontraron diferencias significativas (P<0.01) entre lotes de semilla de lechuga para las variables de porcentaje de germinación (PN), plántulas anormales (PA) y longitud media de hipocótilo (LONG), como se observa en la Tabla 3.3.

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Tabla 3.3 Cuadrados medios y valor de probabilidad de las variables medidas para la semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

***: altamente significativo (p<0.01) **: significativo (p<0.05) ns: no significativo (p> 0.10). En la Tabla 3.4 se pueden comparar los valores medios para las variables medidas en la prueba de calidad fisiológica entre lotes de semilla de lechuga. La Figura 3.9 presenta los resultados de la prueba de germinación al primer conteo, para los doce lotes en estudio. Se observa diferencia entre ellos, lo que permite calificar a los lotes 2 y 12 (Tlalnepantla y Xochimilco) como los mejores con casi un 100 % de germinación; por el contrario los lotes 4 y 6 (Iztapalapa y Tlalnepantla) son los peores con un 0% de germinación.

Tabla 3.4 Medias de las variables medidas para la semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

Medias con la misma letra en una columna son estadísticamente iguales según la prueba de mínima diferencia significativa. PN = porcentaje de germinación; PA = plántula anormales finales; y LONG = longitud media de hipocótilo.

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Figura 3.9 Porcentaje de germinación en lotes de semilla de lechuga (Elaboración propia, 2012)

Para el conteo final, en donde sólo se tomó en cuenta para el conteo las plántulas normales, se observaron cambios en los resultados finales (Figura 3.9). Se observan los lotes 12, 11, 10 y 2 como los mejores con valores arriba del 85% de germinación; por el contrario los ocho lotes restantes tienen una germinación entre el 5% y el 60%, donde los lotes 4 y 6 son los peores con un 0% de germinación. En la Figura 3.10 se puede observar la longitud media de hipocótilo para todos los lotes, donde puede verse que el lote 2 presentó la mayor longitud con 3.03 cm., y la longitud menor obtenida fue de 1.7 cm. correspondiente al lote 1 todo esto a los 7 días de la siembra.

Figura 3.10 Longitud media de hipocótilo en semillas germinadas (Elaboración propia, 2012)

PRUEBA DE CALIDAD SANITARIA. En la prueba de calidad sanitaria se encontraron diferencias significativas (P<0.05) entre lotes de semilla de lechuga, para los géneros de hongos desarrollados por la prueba de calidad sanitaria para hongos de almacén (cultivo MSA) como se observa en la Tabla 3.5. 58 98 88 0 78 0 62.5 89.5 82 90.5 95 99 5 86 60.5 0 48 0 43 52.5 52.5 86 86.5 96 0 20 40 60 80 100 120 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 % D E GE R M INACIÓ N