Using Command Clusters

Se obtuvieron masas de huevos directamente de raíces infectadas con Meloidogyne, con un estilete y con la ayuda de un microscopio estereoscopio, con mucho cuidado se extrajeron las masas de huevos, colocándolos en una placa Petri conteniendo agua. Se seleccionaron las masas de huevos con mayor uniformidad. Se transfirieron dos masas de huevos dentro de un contenedor conformado por tubos de PVC de 1.5 cm de altura y 2.5 cm de diámetro, las cuales tenían una malla en la base, estas mallas se colocaron en placas petri de 5.5 cm de diámetro con 10 ml de solución tratamiento. Los J2 que eclosionaron del huevo y atravesaron la mallita quedaron suspendidos en la placa Petri (Figura 21, 25).

Se evaluó el número de juveniles (J2) suspendidos en el fondo de la placa. Los registros se tomaron cada 2 días, hasta que ya no hubo emergencia de ningún juvenil del tratamiento testigo, entonces se suspendió las ootecas en agua, evaluándose por última vez al tercer día después de la última evaluación (Farfán, 2011; Saire, 2017). Los resultados se expresaron en número de juveniles J2 emergidos de huevos dentro de la masa gelatinosa.

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Figura 21. Prueba de eclosión de huevos dentro de la masa gelatinosa de M. incognita. 1, 2. Corte de masa de huevos, 3. Masas de huevos, 4.

Transferencia de masas de huevos dentro de un contenedor, 5. Aplicación de tratamiento. Fuente. Modificado de Farfán, (2011).

1

2

3

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b. Prueba de eclosión de huevos libres de Meloidogyne

A partir de raíces de Granado con fuertes nodulaciones, los huevos se obtuvieron por el método de Hussey y Baker (1973) que consiste en lavar cuidadosamente las raíces para no eliminar las masas de huevos adheridas a ella, para luego picarlas en pequeños pedazos de 0.5 cm aproximadamente y sumergirlas en un recipiente conteniendo hipoclorito de sodio a una concentración de 0.5%. El recipiente se cerró herméticamente y se agitó vigorosamente por un periodo de tres minutos con el objetivo de que las masas de huevos sean removidas de la superficie de las raíces y disueltas, dejando los huevos libres (Zuckerman, 1985).

Luego las raíces fueron vertidas a través de dos tamices, de 200 micras (70 mesh) y seguidamente de 38 micras (400 mesh) de arriba hacia abajo y se enjuagó con abundante agua de caño para eliminar los restos de hipoclorito de sodio. En el primer tamiz quedaron los restos de raíces y partes vegetales de la planta. Los huevos quedaron retenidos en el tamiz de 38 micras. Luego con ayuda de una pizeta, se colectó los huevos en agua, posteriormente se vertió a un vaso de 100 ml (Figura 22, 23). En placas petri de 60x15 mm graduadas, se realizó el recuento de huevos por 10 ml de solución, en 10 repeticiones con la ayuda de un microscopio estereoscopio a 40X.

Figura 22. Obtención y conteo de huevos de Meloidogyne.A. Raíces lavadas cuidadosamente, B.

Raíces picadas en pequeños pedazos, C. Raíces vertidas a través de dos tamices de 200 y 38 micras,

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Para realizar la prueba de eclosión de huevos libres de la masa gelatinosa, se utilizaron contenedores de PVC de 1.5 cm de altura y 2.5 cm de diámetro con una malla en la base, en el cual se colocó papel facial en su interior. Estos contenedores se colocaron en placas petri de 5.5 cm de diámetro con 10 ml de solución tratamiento.

Se homogenizó la suspensión de huevos y se colocó una cantidad de suspensión que contenga 100 huevos dentro del cesto dentro del papel facial. Los J2 que eclosionaron del huevo y atravesaron el papel facial quedaron suspendidos en la placa Petri (Figura 23, 25).

Se evaluó el número de juveniles (J2) suspendidos en el fondo de la placa. Los registros se tomaron cada 2 días, hasta que ya no hubo emergencia de ningún juvenil del tratamiento testigo (Farfán, 2011; Merino 2004; Saire, 2017). Los resultados fueron expresados en porcentaje de J2 eclosionados.

Figura 23. Procedimiento de la prueba de eclosión de huevos fuera de la masa gelatinosa de M. incognita.1. Corte de raíces infestadas en pequeños trozos, 2. Raíces agitadas vigorosamente en HCl al 0.5%, 3. Raíces vertidas en tamices de 200 y 400 um. 4. Colecta de huevos de Meloidogyne. 5.

Transferencia de huevos, dentro de un contenedor. 6. Aplicación de solución tratamiento.

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c. Prueba de Movimiento de Juveniles J2 de Meloidogyne

Se separaron trozos de raíces infectadas y se lavaron con abundante agua y con sumo cuidado, Luego se extrajeron de este conjunto de raíces masas de huevos. Para la obtención de los juveniles (J2) se colocaron estas masas de huevos dentro tamices de plástico PVC con una malla en la base. Estas se colocaron en placas petri de 10 cm de diámetro conteniendo agua de caño. Los juveniles emergieron de las masas de huevos y cayeron al fondo de la placa. Después de 48 horas, se vertió la suspensión nematodo pasándolo por un tamiz de 38 um (400 mesh), colectándolos con una pizeta en un recipiente. Luego, se utilizaron tubos de PVC de 1.5 cm de altura y 2.5 cm de diámetro con una malla en la base, en el cual se colocó papel facial cubriendo completamente su interior. Estas mallas se colocaron en placas petri de 5.5 cm de diámetro con 10 ml de solución tratamiento. Se homogenizó la suspensión de nematodos y se colocó una cantidad de suspensión que contenia 100 juveniles J2 dentro del cesto dentro del papel facial (Figura 24, 25).

Se evaluó el número de juveniles móviles (J2) que atravesaron el papel facial y que quedaron suspendidos en el fondo de la placa petri. Los registros se tomaron cada 2 días, hasta que ya no hubo presencia de ningún juvenil del tratamiento testigo. (Farfán, 2011; Merino 2004; Saire, 2017). Los resultados fueron expresados en porcentaje de J2 móviles.

Figura 24. Procedimiento para la prueba de movimiento de juveniles J2 del nemátodo del nudo

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Figura 25. Pruebas in vitro sobre el comportamiento de M. incognita. A, B, C. Imagen panorámica del ensayo. Prueba de eclosión de huevos: D, E. Dentro de la masa gelatinosa, F, G.

Libres de la masa gelatinosa. H, I. Prueba de movimiento de J2. Fuente. Propia, Laboratorio de Nematologia UNSA - Arequipa.

A

B

C

D

F

H

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d. Diseños experimentales para Pruebas de eclosión de huevos y movimiento de J2

 Tipo de diseño. Diseño Completamente al Azar (DCA).

 Tratamientos. Se evaluó el efecto de diferentes soluciones tratamiento a una concentración de 2000 ppm, para todas las pruebas.

Tabla 4. Nombre comercial e ingrediente activo de tratamientos para: Pruebas de eclosión de huevos dentro y fuera de la masa gelatinosa y prueba de movimiento de Juveniles J2.

Tratamiento Producto

Comercial Ingrediente Activo

Concentración del ingrediente activo (ml/L) 2000 ppm T1 NEMAGOLD Tagetes erecta 1

T2 BLOCKER Basillus, Pochonia, Trichoderma 2

T3 LILANOVA Paecilomyces lilacinus 2

T4 VIDATE Oxamyl 8.333

T5 RUGBY Cadusafos 10

T6 MELAZA Melaza 2

TC TESTIGO Agua -

 Repeticiones: 5 repeticiones.

 Unidad Experimental (UE): La unidad experimental (UE) conforma por individuos de Meloidogyne incognita (masas de huevos, huevos y Juveniles J2) colocados dentro de un tubo de PVC de 1.5 cm de altura y 2.5 cm de diámetro, la cual contiene una malla de tul en la base; colocada en una placa petri de 5.5 cm de diámetro con 10 ml de solución tratamiento.

73  Croquis del experimento

 T1 Nemagold  T2 Blocker  T3 Lilanova  T4 Vydate  T5 Rugby  T6 Melaza  TC Testigo

 Evaluaciones y registros: Se evaluó el número de juveniles (J2) suspendidos en el fondo de la placa petri. Los registros se tomaron cada 2 días, hasta que ya no hubo emergencia de ningún juvenil del tratamiento testigo. Los resultados se expresaron en número de juveniles (J2) emergidos.

1

2

3

4

5

6

7

A

B

C

D

E

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3.2.4. Efecto de los tratamientos sobre la población de juveniles J2 de Meloidogyne