Pathromtin SL

(1)

Pathromtin* SL

Intended Use

Reagent for the determination of the

Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (APTT) in citratedactivated partial thromboplastin time (APTT) in citrated human plasma.

human plasma.

Summary and Explanation

Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation Pathromtin* SL Reagent enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors. In conjunction with decient plasmas it ena

junction with decient plasmas it enables the individual factors of the inbles the individual factors of the intrinsic system to betrinsic system to be

quantied and permits diagnosis of hemophilia. In addition it can be used for monitoring

therapy with unfractionated heparin therapy with unfractionated heparin11_._.

The use of the APTT as a

The use of the APTT as a screening test for coagulation disorders is indicated particularlyscreening test for coagulation disorders is indicated particularly prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and prior to surgical interventions as this allows potential hemophiliacs to be diagnosed and given special therapeutic protection.

given special therapeutic protection.

The presence of non-specic inhibitors such as the lupus-like anticoagulant may prolong

the APTT, but this effect i

the APTT, but this effect is variable and generally recognized as s variable and generally recognized as being related more to thebeing related more to the nature of the APTT reagent employed

nature of the APTT reagent employed22_._.

Principle of the Method

Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface activator leads to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The addition of calcium ions triggers the coagulation process; the time to formation of a brin clot is measured.

the coagulation process; the time to formation of a brin clot is measured.

Reagents

Note Note

Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Pathromtin* SL can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several co-agulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay agulation analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay specic handling and performance information which may differ from that provided in these

specic handling and performance information which may differ from that provided in these

Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides Instructions for Use. In such a case, the information contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer!

consult the instruction manual of the instrument manufacturer! Materials provided

Materials provided 10 x 5 mL,

10 x 5 mL,[REF][REF] OQGS 29 OQGS 29 20 x 5 mL,

20 x 5 mL,[REF][REF] OQGS 35, OQGS 35,[REF][REF] 10484200 10484200 Composition

Composition

Pathromtin* SL Reagent:

Pathromtin* SL Reagent:Silicon dioxide particles (1.2 Silicon dioxide particles (1.2 g/L), plant phospholipids (0.25 g/L),g/L), plant phospholipids (0.25 g/L), sodium chloride, HEPES, pH 7.6

sodium chloride, HEPES, pH 7.6 Preservative: Sodium azide (< 1 Preservative: Sodium azide (< 1 g/L).g/L). Warnings and Precautions Warnings and Precautions 1. For

1. Forin-vitro- in-vitro- diagnostic use.diagnostic use.

2.

2. Contains sodium azide (Contains sodium azide (< 1 g/L) as a prese< 1 g/L) as a preservative. Sodium azide can rvative. Sodium azide can react with copperreact with copper or lead pipes in drain lines to

or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accor-form explosive compounds. Dispose of properly in accor-dance with local regulations.

dance with local regulations. Preparation of the Reagents Preparation of the Reagents

Pathromtin* SL Reagent must be gently inverted (5 to 8 times) to mix before rst use and

must be used at room temperature (+15 to +25

must be used at room temperature (+15 to +25 °C). Every 24 hours of use, °C). Every 24 hours of use, the reagent mustthe reagent must be inverted to resuspend any

be inverted to resuspend any sediment.sediment. Calcium Chloride Solution 0.025 mol/L: warm to Calcium Chloride Solution 0.025 mol/L: warm to +37 °C.+37 °C. Storage and Stability

Storage and Stability Stored unopened at +2 to +8

Stored unopened at +2 to +8 °C Pathromtin* SL Reagent may be used by °C Pathromtin* SL Reagent may be used by the expiry datethe expiry date given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks

given on the label. Once opened Pathromtin* SL Reagent must be used within 2 weeks

(store at +2 to +25 °C). (store at +2 to +25 °C).

Information regarding on-board stability is specied in the Reference Guides (Application

Sheets) for the different coagulation analyzers. Sheets) for the different coagulation analyzers. Materials required but not provided Materials required but not provided -

- Calcium Calcium Chloride Chloride (CaCl(CaCl22) Solution 0.025 mol/L) Solution 0.025 mol/L

-

- Control Control Plasma Plasma N, or N, or DadeDade ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 1 as control for}_{Level 1 as control for}_{the normal range}_{the normal range}

-

- Control Control Plasma Plasma P, or P, or DadeDade ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 2, or Dade}_{Level 2, or Dade} ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 3 as control for the}_{Level 3 as control for the}

pathological/therape pathological/therapeutic utic rangerange -

- Pipettes for Pipettes for precise meprecise measurement oasurement of 0.1 f 0.1 mLmL -

- Plastic Plastic test test tubestubes -

- Coagulation Coagulation analyzeranalyzer

Specimen Collection and Preparation

To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium

To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 partscitrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for no less than venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for no less than 15 minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until

15 minutes at 1500 x g, remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until

use in the test

use in the test (max. 4 hours). In the US (max. 4 hours). In the US please refer to the CLSI Document H21-A5, entitledplease refer to the CLSI Document H21-A5, entitled “Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and “Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays”

Performance of Coagulation Assays”33_._.

Procedure

Manual Testing: Manual Testing:

Pipette into a test tube pre-warmed to +37 °C: Pipette into a test tube pre-warmed to +37 °C:

C

Ciittrraatteed d ppllaassmmaa 11000 0 µµLL P

Paatthhrroommttiinn* * SSL L RReeaaggeenntt 11000 0 µµLL Incubate for 2 minutes at +37 °C

Incubate for 2 minutes at +37 °C C

Caallcciiuum m CChhlloorriidde e SSoolluuttiioon n ((++337 7 °°CC!!)) 11000 0 µµLL

On adding the Calcium Chloride Solution start the stopwatch or timer on the coagulation On adding the Calcium Chloride Solution start the stopwatch or timer on the coagulation analyzer and measure the coagulation time.

analyzer and measure the coagulation time.

Monitoring of Unfractionated Heparin Therapy with APTT Monitoring of Unfractionated Heparin Therapy with APTT When using the APTT for

When using the APTT for this purpose, the factors inuencing the test should this purpose, the factors inuencing the test should be kept inbe kept in

mind. General considerations are listed below. mind. General considerations are listed below. A)

A) Time oTime of collef collection iction is impors important stant since thince theein-vivo in-vivo _{half-life of unfractionated heparin is}_{half-life of unfractionated heparin is}

approximately 1.5 hours

approximately 1.5 hours44_{. When it is}_{. When it is}_{administered, it has an immediate anticoagulant}_{administered, it has an immediate anticoagulant}

effect but the degree of this effect decreases rapidly with time. This is especially effect but the degree of this effect decreases rapidly with time. This is especially apparent with intermittent single intravenous injections.

apparent with intermittent single intravenous injections. B)

B) The aThe anticoagulant nticoagulant used for used for sample collectiosample collection can n can alter tealter test results.st results. C)

C) Platelet factor Platelet factor 4, a hepa4, a heparin neutralizing rin neutralizing factor in platelet factor in platelet alpha-granules, alpha-granules, can be releacan be releasedsed by platelet aggregation or damage. To prevent this occurrence

by platelet aggregation or damage. To prevent this occurrence in-vitro in-vitro , the specimen, the specimen

should be collected with a minimum of trauma. Cold temperatures are known to induce

platelet aggregation and release platelet factor 4; therefore, centrifugation at room platelet aggregation and release platelet factor 4; therefore, centrifugation at room temperature is recommended for heparin testing.

temperature is recommended for heparin testing. D)

D) Using APTT Using APTT to monitor uto monitor unfractionated henfractionated heparin therapy parin therapy is time-dependis time-dependent. Delay inent. Delay in testing samples will result in prolonged APTT determinations. Therefore, it is testing samples will result in prolonged APTT determinations. Therefore, it is imperative that the testing on all samples be performed as soon as possible. imperative that the testing on all samples be performed as soon as possible. E)

E) Increased conIncreased contact activation tact activation times may rtimes may result in presult in prolonged APTT olonged APTT in plasma coin plasma contai- ntai-ning heparin. It is

ning heparin. It is imperative that the optimal heating-activation time of the imperative that the optimal heating-activation time of the Pathrom- Pathrom-tin* SL-plasma mixture be rigidly

tin* SL-plasma mixture be rigidly standardizedstandardized55_._.

F)

F) Different Different test systems test systems (i.e. manu(i.e. manual, photo-opal, photo-optical, etc.) tical, etc.) will exhibit will exhibit variable heparvariable heparinin sensitivity. Interchanging of test systems should be avoided.

sensitivity. Interchanging of test systems should be avoided. G)

G) Baseline data oBaseline data on the APTT n the APTT of each patienof each patient before the t before the start of therstart of therapy should beapy should be established where feasible to determine the respective patient APTT as it relates to established where feasible to determine the respective patient APTT as it relates to the reference range established for the test

the reference range established for the test in that laboratory.in that laboratory. H)

H) Studies have Studies have shown variability shown variability in original ein original estimates of stimates of the quality othe quality of unfractionatef unfractionatedd heparin from different sources and

heparin from different sources and different manufacturers.different manufacturers.In-vivo In-vivo _{reactivity varies}_{reactivity varies}

with the type of

with the type of heparin administered, the metabolism of the individual and heparin administered, the metabolism of the individual and other co-other co-administrated medications

administrated medications4,64,6_._.

I)

I) BecauBecause the APTT case the APTT can vary with tecn vary with techniquhnique, methoe, method, equipd, equipmentment, reage, reagent lot and he-nt lot and he-parin used, each laboratory must establish its

parin used, each laboratory must establish its own therapeutic ranges, or verify themown therapeutic ranges, or verify them whenever one or more of the aforementioned variables is

whenever one or more of the aforementioned variables is changed. This can be donechanged. This can be done by simultaneously determining the APTT and the heparin concentration for samples by simultaneously determining the APTT and the heparin concentration for samples from patients receiving heparin therapy. A dose response curve can be calculated from patients receiving heparin therapy. A dose response curve can be calculated from the data using regression analysis, and the APTT range corresponding to from the data using regression analysis, and the APTT range corresponding to a heparin concentration of 0.3 - 0.7 U/mL (by a factor Xa inhibition assay) can a heparin concentration of 0.3 - 0.7 U/mL (by a factor Xa inhibition assay) can be derived

be derived4,6,74,6,7_._.

Internal Quality Control Internal Quality Control Normal

Normal range: range: Control Control Plasma Plasma N, N, or or DadeDade ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 1}_{Level 1}

Pathological ran

Pathological range: ge: Control Control Plasma Plasma P, oP, or Dr Dadeade ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 2, or Dade}_{Level 2, or Dade} ® ® _Ci-Trol_Ci-Trol ® ® _{Level 3}_{Level 3}

Two controls (one in the

Two controls (one in the normal range and one in normal range and one in the pathological/therapeutic range) mustthe pathological/therapeutic range) must be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least be measured at the start of the test run, after each change of reagent vial, and at least once during an 8-hour shift. The control material should be

once during an 8-hour shift. The control material should be prepared and processed in theprepared and processed in the same manner as the patient samples. Each

same manner as the patient samples. Each laboratory should establish its own condencelaboratory should establish its own condence

intervals for the controls. This interval is

intervals for the controls. This interval is generally ± 2 to ± generally ± 2 to ± 2.5 standard deviations from the2.5 standard deviations from the mean control value. If the control values are outside of

mean control value. If the control values are outside of the condence interval, the controls,the condence interval, the controls,

reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it

reagents and instrument must be checked. Before reporting the patient values, it is recomis recom- -mended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the

mended that all steps should be documented that were taken to identify and rectify the

problem. New control ranges should be dened for

problem. New control ranges should be dened for each new lot of reagents or each new lot of reagents or controls.controls.

Results Results

The result is given in seconds. The result is given in seconds.

Limitations of the Procedure

Interferences of APTT are described in bibliography references

Interferences of APTT are described in bibliography references8-108-10_{. Therapeutic doses of}_{. Therapeutic doses of} hirudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times

hirudin or other direct thrombin inhibitors may prolong clotting times1111_{. The choice of anti-}_{. The choice of} anti-coagulant (i.e. oxalate instead of citrate)

coagulant (i.e. oxalate instead of citrate) and the condition of and the condition of the specimen (e.g. hemolyzed,the specimen (e.g. hemolyzed, lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical lipemic, parenteral feeding, etc.) may affect results. The latter is particularly true of optical instrumentatio

instrumentation measurements of the APTT. n measurements of the APTT. Preactivation of the sample due to Preactivation of the sample due to poor phle-poor phle-botomy technique can lead to false

botomy technique can lead to false results. Referencing the Sample Handling and Collec-results. Referencing the Sample Handling and Collec-tion secCollec-tion of CLSI Document H21-A5 it

tion section of CLSI Document H21-A5 it is recommended that test tubes with non-wetableis recommended that test tubes with non-wetable surfaces (e.g., plastic) be used rather than glass test

surfaces (e.g., plastic) be used rather than glass test tubes.tubes.

Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and meet product specications. User dened modications are not supported

performance and meet product specications. User dened modications are not supported

by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the re-sponsibility of the user to validate modications to these instructions or use

sponsibility of the user to validate modications to these instructions or use of the reagentsof the reagents

on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions on analyzers other than those included in Siemens Application Sheets or these instructions for use.

for use.

Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history, clinical presentation and other ndings.

history, clinical presentation and other ndings.

Expected Values

Reference intervals vary from laboratory to

Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population servedlaboratory depending on the population served and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory and the technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the must establish its own reference intervals or verify them whenever one or more of the aforementioned variables are changed.

aforementioned variables are changed.

In a study of ostensibly healthy individuals using a specic lot of Pathromtin* SL Reagent,

the following values were obtained: the following values were obtained:

M Meeddiiaann 990 0 % % RReeffeerreenncce e IInntteerrvvaall 5 5thth_P_P_e_e_r_r_c_c_e_e_n_n_t_t_i_i_l_l_e_e ₉₉₅₅thth_Percentile_Percentile 100 individuals Sysmex 100 individuals Sysmex ® ® _C_C_A_A_-_-₁₁₅₅₀₀₀₀ ₃₃₀₀_._.₉₉_s_s_e_e_c_c_._. ₂₂₆₆_._.₄₄_s_s_e_e_c_c_._. ₃₃₇₇_._.₅₅_s_s_e_e_c_c_._. 111 individuals BCS 111 individuals BCS ® ®_S_S_y_y_s_s_t_t_e_e_m_m ₃₃₀₀_._.₂₂_s_s_e_e_c_c_._. ₂₂₅₅_._.₉₉_s_s_e_e_c_c_._. ₃₃₆₆_._.₆₆_s_s_e_e_c_c_._.

Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also

Reference ranges for other populations such as pediatric groups should also be establishedbe established where warranted.

(2)

Specic Performance Characteristics

Precision

Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per day (n = 8 replicates per day), to total n = 40 for normal and pathological control plasmas as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was calculated from the individual n = 4 precision values for the daily runs over the 5 days. Intra-assay precision ranged from 0.6 - 2.0 % CV, while the inter-assay precision ranged from 0.3 - 2.8 % CV.

Method Comparison

Results of a comparison of APTT determinations using Pathromtin* SL Reagent and an-other commercially available APTT reagent gave a correlation coefcient of 0.96 and a y-intercept of 2.1 sec., and a slope of 0.99.

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coagulometric factor assays. Ann Hematol 1999; 78 (Suppl): 73 (Abstract). BCS, Ci-Trol and Dade are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics. * Pathromtin is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.

Edition June 2010

Pathromtin* SL

Anwendungsbereich

Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) in mensch -lichem Citratplasma.

Diagnostische Bedeutung

Die Bestimmung der APTT mit Pathromtin* SL Reagenz ist ein schneller Suchtest auf Ge-rinnungsstörungen des endogenen Systems und erfasst empndlich die Faktoren VIII und IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist Pathromtin* SL Reagenz geeignet für die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen Systems und zur Diagnose einer Hämophilie. Außerdem kann es zur Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin benutzt werden1_.

Die Messung der APTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstörungen insbesondere vor chirurgischen Eingriffen, um potenzielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz stellen zu können.

Die Anwesenheit von unspezischen Inhibitoren, wie der des Lupus-ähnlichen Antikoagu -lans, können die APTT verlängern. Dieser Effekt i st jedoch variabel und ist generell als ein natürlicher Effekt des verwendeten APTT-Reagenz bekannt2_.

Prinzip der Methode

Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem Oberä -chenaktivator führt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen Gerinnungssystems. Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelöst; gemessen wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.

Reagenzien

Hinweis

Pathromtin* SL kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet werden. Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher (Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/ testspezische Informationen zur Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Infor -mationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!

Inhalt der Handelspackungen 10 x 5 ml,[REF] OQGS 29

20 x 5 ml,[REF] OQGS 35,[REF] 10484200

Zusammensetzung

Pathromtin* SL Reagenz:Siliciumdioxid-Partikel (1,2 g/l), panzliche Phospholipide (0,25 g/l), Natriumchlorid, HEPES, pH 7,6

Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l) Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur zurin-vitro- diagnostischen Anwendung.

2. Enthält Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupfer-oder bleihaltigen Abussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsgemäß entsprechend den örtlichen Richtlinien.

Vorbereitung der Reagenzien

Pathromtin* SL muss vor erstmaligem Gebrauch durch 5- bis 8-maliges Überkopfddre -hen resuspendiert werden und wird bei Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) eingesetzt. Das Resuspendieren muss alle 24 Stunden wiederholt werden, um Sedimentationseffekte zu vermeiden!

Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l auf +37 °C erwärmen. Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen

Pathromtin* SL Reagenz ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 °C gelagert, bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar.

Nach dem erstmaligen Öffnen ist Pathromtin* SL Reagenz 2 Wochen bei +2 bis +25 °C stabil.

Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikations -vorschriften) für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt.

Zusätzlich benötigte Materialien

- Calciumchlorid (CaCl₂)-Lösung 0,025 mol/l

- Kontroll-Plasma N oder Dade ® _Ci-Trol ® _{Level 1 als Kontrolle für den Normalbereich}

- Kontroll-Plasma P oder Dade ® _Ci-Trol ® _{Level 2 oder Dade} ® _Ci-Trol ® _{Level 3 als Kontrolle}

für den pathologischen/therapeutischen Bereich - Pipetten für das genaue Abmessen von 0,1 ml - Teströhrchen aus Plastik

- Gerinnungsmessgerät

Probenabnahme und -vorbereitung

Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorg -fältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 15 Minuten bei 1500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern und bis zum Test bei +15 bis +25 °C aufbewahren (max. 4 Stunden). In den USA bitte auf das CLSI Dokument H21-A5 mit dem Titel „Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays“ beziehen3_.

Testdurchführung

Manuelle Durchführung:

In ein auf +37 °C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren:

Citratplasma 100µl

Pathromtin* SL Reagenz 100 µl

2 Minuten bei +37 °C inkubieren

Calciumchlorid-Lösung (+37 °C!) 100 µl

Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lösung Stoppuhr bzw. Messstelle am Gerinnungsmessge -rät starten und die Gerinnungszeit messen.

Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT

Bei der Überwachung der Heparintherapie mittels APTT-Bestimmung sind die Faktoren zu berücksichtigen, die Einuss auf das T estergebnis haben können. Im Folgenden sind einige allgemeine Hinweise zusammengefasst:

A) Da die Halbwertszeit von unfraktioniertem Heparinin vivo _{ca. 1,5 Stunden beträgt,}

ist der Zeitpunkt der Blutentnahme von entscheidender Bedeutung4_{. Verabreichtes}

Heparin besitzt eine sofort einsetzende gerinnungshemmende Wirkung, die rasch wieder abnimmt. Dieser Effekt ist besonders deutlich bei intermittierend verabreichten Einzelinjektionen i. v. zu beobachten.

B) Das zur Blutabnahme verwendete Antikoagulans kann die Testergebnisse be -einussen.

C) Durch Aggregation bzw. Beschädigung der Plättchen kann der Heparin-neutralisierende Plättchenfaktor 4 aus den Alpha-Granula der Plättchen freigesetzt werden. Um derartige Prozessein vitro _{zu vermeiden, sollten die Proben möglichst vorsichtig abgenommen}

werden. Da niedrige Temperatur bekanntlich die Plättchenaggregation und damit die Freisetzung von Plättchenfaktor 4 auslöst, sollten Proben für Heparintests bei Raum-temperatur zentrifugiert werden.

D) Die Überwachung der Therapie mit unfraktioniertem Heparin mittels APTT-Bestimmung ist zeitabhängig. Verzögerungen bei der Probenbearbeitung können eine Verlängerung der APTT bewirken. Die Proben müssen daher so bald wie möglich untersucht werden. E) Eine verlängerte Kontaktaktivierung kann bei heparinhaltigem Plasma zur Ver

-längerung der APTT führen. Die optimale Inkubationszeit des Cephaloplastin-Plasma-Gemischs ist daher einzuhalten5_.

F) Da verschiedene Testmethoden (z. B. manuell, photo-optisch) eine unterschiedliche Heparin-Empndlichkeit besitzen, sollte ein Wechsel der angewendeten Methode vermieden werden.

G) Zur Ermittlung der patientenspezischen APTT sollte der APTT-Basiswert des Patienten möglichst vor Therapiebeginn bestimmt und mit dem laboreigenen Referenzbereich verglichen werden.

H) Untersuchungen ergaben, dass die Eigenschaften von unfraktionierten Heparinen verschiedener Hersteller bzw. aus unterschiedlichem Ausgangsmaterial von den ursprünglich angenommenen Spezikationen abwichen. In vivo hängt die Reaktivität vom Typ des verabreichten Heparins vom Stoffwechsel des Patienten und von anderen, gleichzeitig angewendeten Arzneimitteln ab4,6_.

I) Da die APTT in Abhängigkeit von den Arbeitstechniken, Methoden, Geräten, Reagenzchargen und dem eingesetzten Heparin variieren kann, muss jedes Labor seine eigenen therapeutischen Bereiche ermitteln bzw. nach dem Wechsel von einem oder mehreren der aufgeführten Parameter verizieren. Dies kann durch die gleichzeitige Bestimmung der APTT und der Heparinkonzentration in Proben von Patienten unter Heparintherapie erfolgen. Durch Regressionsanalyse der Daten kann eine Dosis-Wirkungs-Beziehung aufgestellt und der APTT-Bereich festgelegt werden, der einer Heparinkonzentration von 0,3 - 0,7 U/ml (durch Faktor Xa-Hemmung bestimmt) entspricht4,6,7_.

(3)

Interne Qualitätskontrolle

Normalbereich: Kontroll-Plasma N oder Dade ® _Ci-Trol ® _{Level 1}

Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P oder Dade ® _Ci-Trol ® _{Level 2 oder Dade} ®

Ci-Trol ® _{Level 3}

Zu Beginn eines Testlaufs, bei jedem Reagenzaschenwechsel und mindestens einmal während einer 8-Stunden-Schicht müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine im pathologischen/therapeutischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte wie die Patientenplasmen behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrau-ensbereich für die Kontrollen ermitteln. Dieser beträgt in der Regel ±2 bis ±2,5 Standard -abweichungen vom mittleren Kontrollwert. Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Ver -trauensbereichs, sind die Kontrollen, Reagenzien und das Gerät zu überprüfen. Es wird empfohlen, vor der Ausgabe von Patientenwerten alle Maßnahmen zu dokumentieren, die zur Feststellung und Behebung des Problems ergriffen wurden. Bei jeder neuen Reagenzi-en- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche deniert werden.

Ergebnisse

Das Messergebnis wird in Sekunden angegeben.

Einschränkungen der Testdurchführung

Über Störungen der APTT wird in der Literatur berichtet8-10_{. Therapeutische Dosen von}

Hi-rudin oder anderen direkten Thrombininhibitoren können zu verlängerten Gerinnungszeiten führen11_{. Die Ergebnisse können außerdem durch das gewählte Antikoagulans (z. B. Oxalat}

anstelle von Citrat) beeinusst werden, sowie durch die Beschaffenheit der Probe (z. B. hä -molytisch, lipämisch, künstliche Ernährung, usw.), welche insbesonders bei der optischen Bestimmung der APTT von Bedeutung ist. Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe kann zu falschen Ergebnissen führen. Im Abschnitt über Probennahme und -handhabung des CLSI Dokuments H21-A5 wird empfohlen, Teströhrchen mit nicht-benetzbarer Oberä -che (z. B. Plastik) anstelle von Glasröhr-chen einzusetzen.

Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf opti-male Produktleistung und Einhaltung der Produktspezikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die Testergebnisse beeinussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanwei -sungen genannten Analysengeräten zu validieren.

Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.

Referenzbereiche

Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der zu untersuchenden Population und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräten und Reagenz -chargen. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeits-techniken, Methoden, Geräte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln, bzw. die Referenzbereiche nach einem Wechsel der aufgeführten Parameter verizieren. In einer Studie an offensichtlich gesunden Probanden wurden mit einer spezischen Char -ge Pathromtin* SL Rea-genz fol-gende Werte erhalten:

Median 90 % Referenzintervall 5. Perzentile 95. Perzentile 100 Probanden Sysmex ® _CA-1500 _{30,9 sec.} _{26,4 sec.} _{37,5 sec.}

111 Probanden BCS ®_System _{30,2 sec.} _{25,9 sec.} _{36,6 sec.}

Für andere Kollektive, wie z. B. pädiatrische Patienten, sollten gegebenenfalls eigene Re -ferenzbereiche ermittelt werden.

Leistungsmerkmale des Tests

Präzision

Mit einem opto-densitometrischen Messverfahren wurden Präzisionsuntersuchungen an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool, über 5 Tage, zweimal täglich (n = 8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen durchgeführt. Der Variationskoefzient in der Serie wurde aus den einzelnen 4-fach-Bestim -mungen berechnet. Er lag zwischen 0,6 und 2,0 %, während der Variationskoefzient von Tag zu Tag zwischen 0,3 und 2,8 % lag.

Methodenvergleich

Bei einem Vergleich von APTT-Bestimmungen mit Pathromtin* SL Reagenz und einem anderen APTT-Reagenz ergab sich ein Korrelationskoefzient von 0,96 bei einem y-Ach -senabschnitt von 2,1 sec. und einer Steigung von 0,99.

Literatur

Siehe englische Gebrauchsanweisung.

BCS, Ci-Trol und Dade sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. * Pathromtin ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex ist eine eingetragene Marke der SYSMEX C ORPORATION.

Ausgabe Juni 2010

Pathromtin* SL

Domaine d’utilisation

Réactif pour la détermination du Temps de Céphaline Activé (TCA) dans le plasma citraté humain.

Intérêt diagnostique

La détermination du TCA à l'aide de Réactif Pathromtin* SL est un test de dépistage ra-pide des troubles du système endogène de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII, IX, et aux facteurs de la phase contact. Utilisé en association avec des plasmas exempts, Réactif Pathromtin* SL permet le dosage des différents facteurs du système endogène de la coagu-lation, ainsi que le diagnostic d'hémophilie. Il peut également être utilisé pour la surveillance d'un traitement par héparine non fractionnée1_.

La détermination du TCA est indiquée comme test de dépistage des troubles de la coagula-tion, en particulier avant une intervention chirurgicale, an de pouvoir prendre les mesures thérapeutiques appropriées chez les patients susceptibles de faire une hémorragie.

La présence d’inhibiteurs non spéciques, tel l’anticoagulant de type lupus, peut allonger le TCA, même si cet effet est variable et généralement considéré comme lié à la nature du réactif TCA utilisé 2_.

Principe de la méthode

L'incubation du plasma avec une quantité optimale de phospholipides et d'un activateur de surface entraîne l'activation des facteurs du système endogène de la coagulation. L'addition d'ions calcium déclenche le processus de la coagulation. On mesure alors le temps écoulé jusqu'à la formation du caillot de brine.

Réactifs

Remarque

Pathromtin* SL peut être utilisé manuellement ou sur un appareil automatisé de coagula-tion. Siemens Healthcare Diagnostics propose des guides de référence (ches d’ap -plication) pour plusieurs analyseurs de coagulation. Les Guides de référence (ches d’application) contiennent des informations sur les performances et l’utilisation spécique des tests sur les analyseurs, qui peuvent différer de celles mentionnées dans la présente notice. Le cas échéant, les informations contenues dans les Guides de référence (ches d’application) annulent et remplacent celles contenues dans la présente notice. Veuillez éga-lement, consulter le manuel de formation du fabricant de l'analyseur!

Contenu des coffrets 10 x 5 ml,[REF] OQGS 29

20 x 5 ml,[REF] OQGS 35,[REF] 10484200 Composition

Réactif Pathromtin* SL : particules de dioxyde de silicium (1,2 g/l), phospholipides végé-taux (0,25 g/l), chlorure de sodium, HEPES, pH 7,6

Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l) Mises en garde et précautions d’emploi

1. Ne doit être employé que pour un usagein vitro _.

2. Contient de l’azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur. L’ azide de sodium peut réagir avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés explosifs. L’évacuer conformément aux réglementations locales.

Préparation des réactifs

Avant son premier emploi, remettre le Réactif Pathromtin* SL en suspension en retournant le acon 5 à 8 fois, et l’utiliser à la température ambiante (+15/+25 °C). La remise en sus -pension doit être répétée toutes les 24 heures pour éviter tout effet de sédimentation ! Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l à +37 °C.

Stabilité et conditions de conservation

Conservé non ouvert à +2/+8 °C, Réactif Pathromtin* SL peut être utilisé jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette.

Après première ouverture, il reste stable 2 semaines à +2/+25 °C.

Les données de stabilité sur analyseur sont indiquées dans les guides de référence (ches d'application) des différents analyseurs de coagulation.

Autres réactifs nécessaires

- Solution de chlorure de calcium (CaCl2) 0,025 mol/l

- Plasma de contrôle N ou Dade ® _Ci-Trol ® _{niveau 1 comme contrôle dans le domaine normal} - Plasma de contrôle P ou Dade ® _Ci-Trol ® _{niveau 2 ou Dade} ® _Ci-Trol ® _{niveau 3 comme}

contrôle dans le domaine pathologique/thérapeutique - Pipettes pour une distribution exacte de 0,1 ml - Tubes à essai en plastique

- Automate de coagulation

Prélèvement et préparation des échantillons

Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec 9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendant au moins 15 min à au moins 1500 x g, prélever le plasma surna-geant, et le conserver à +15/+25 °C (max. 4 heures) jusqu’au test. Aux USA, se reporter au document CLSI H21-A5 intitulé «Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays»3_.

Réalisation du test

Méthode manuelle :

Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37 °C :

Plasma citraté 100 µl

Réactif Pathromtin* SL 100 µl

Laisser incuber 2 min à +37 °C

Solution de chlorure de calcium (+37 °C !) 100 µl

Déclencher le chrono mètre ou la chambre de mesure de l'automate de coagulation au moment de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de coagulation.

Surveillance d’un traitement à l’héparine non fractionnée par le TCA

Dans le cadre de la surveillance d’un traitement à l’héparine par le TCA, il faut tenir compte des facteurs qui peuvent inuencer ce test. Quelques r emarques générales sont résumées ci-dessous :

A) Dans la mesure où le temps de demi-vie de l’héparine non fractionnée est d’env. 1,5 heurein-vivo , du prélèvement est l'heure du prélèvement est important4_{. Lors de}

son administration, l'héparine a un effet anticoagulant immédiat mais l'amplitude de cet effet décroît rapidement dans le temps. Ceci est particulièrement visible en cas d’injections intraveineuses intermittentes.

B) L’anticoagulant utilisé pour le prélèvement peut fausser le résultat du test.

C) L’agrégation ou l’endommagement des plaquettes peut libérer le facteur 4 plaquettaire 4

des granules alpha des plaquettes, facteur qui neutralise l’héparine. Pour éviter ce phéno-mènein-vitro , le prélèvement de l'échantillon doit être fait d'une manière non traumatique. Dans la mesure où l'on sait qu’une température basse favorise l’agrégation des pla-quettes et déclenche ainsi la libération du facteur 4 plaquettaire 4, il est recommandé de centrifuger les échantillons devant être testés pour une surveillance d’héparine à la température ambiante.

D) La surveillance d’un traitement à l’héparine non fractionnée par un TCA est variable dans le temps. Si un échantillon n’est pas testé immédiatement, le TCA peut être allongé. Il est donc recommandé de tester les échantillons le plus rapidement possible après leur prélèvement.

E) Une activation de la phase contact plus longue peut entraîner un allongement du TCA pour les plasmas contenant de l’héparine. Il est impératif que le temps d'incuba-tion optimal du mélange Pathromtin* SL-plasma soit parfaitement respecté5_.

(4)

Pathromtin* SL

Uso Previsto

Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato (APTT) nel plasma citratato umano.

Riassunto e Spiegazione

Il Reagente Pathromtin* SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema endogeno della coagulazione e rivela con sensibilità decit dei fattori VIII, IX e dei fattori di contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Reagente Pathromtin* SL è adatto per la determina-zione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emolia. Oltre a ciò, può essere usato per monitorare la terapia con eparina non frazionata1_.

La misura dell'APTT è indicata per rilevare potenziali soggetti emolici, in modo da sottopor -li ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico.

La presenza di inibitori non-specici, come l’anticoagulante lupus-like, possono prolungare l’APTT. Questo effetto, però, è variabile e generalmente noto come un effetto collegato alla natura del reagente APTT utilizzato2_.

Principio del Metodo

L'incubazione del plasma con una quantità ottimale di fosfolipidi e di un attivatore di super-cie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. L’aggiunta di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene quindi misurato il tempo di for-mazione del coagulo di brina.

Reagenti

Nota

Pathromtin* SL può essere utilizzato manualmente o su analizzatori per coagulazione automatici. Siemens Healthcare Diagnostics fornisce Guide di Riferimento (Protocolli Applicativi) per diversi analizzatori per coagulazione. Le Guide di riferimento (Protocolli Applicativi) contengono informazioni sulla manipolazione e sulle prestazioni speciche per i diversi analizzatori/test che possono essere diverse da quelle fornite nelle presenti Istru-zioni per l'uso. In tal caso, le informaIstru-zioni contenute nelle Guide di riferimento (Protocolli Applicativi) sostituiscono le informazioni contenute nelle presenti Istruzioni per l’uso. Consul-tare anche il manuale di istruzioni del produttore dello strumento!

Materiali forniti

10 x 5 mL,[REF] OQGS 29

20 x 5 mL,[REF] OQGS 35,[REF] 10484200 Composizione

Reagente Pathromtin* SL: particelle di biossido di silicio (1,2 g/L), fosfolipidi vegetali (0,25 g/L), cloruro di sodio, HEPES, pH 7,6

Conservante: sodio azide (< 1 g/L) Avvertenze e Precauzioni

1. Solo per uso diagnosticoin-vitro _.

2. Contiene sodio azide (< 1 g/L) come conservante. La sodio azide può reagire con le tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provve-dere allo smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali.

Preparazione dei Reagenti

Il Reagente Pathromtin* SL deve essere delicatamente capovolto (da 5 a 8 volte) per miscelarlo prima del primo utilizzo e deve essere utilizzato a temperatura ambiente (da +15 a +25 °C). Ogni 24 ore di utilizzo, i l reagente deve essere capovolto per risospen-dere l’eventuale sedimento.

Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 °C. Conservazione e Stabilità

Prima dell'apertura il Reagente Pathromtin* SL può essere utilizzato no alla data di scadenza indicata sull’etichetta del acone se conservato, sigillato, a +2 a +8 °C. Dopo la prima apertura il Reagente Pathromtin* SL è stabile per 2 settimane se conservato a +2 a +25 °C.

Le informazioni riguardanti la stabilità on-board sono specicate nelle Reference Guides (Protocolli Applicativi) per i diversi analizzatori per coagulazione.

Materiale necessario, ma non fornito

- Soluzione di Calcio Cloruro (CaCl2) 0,025 mol/L

- Control Plasma N, oppure Dade ® _Ci-Trol ® _{Livello 1 come controllo nell’intervallo normale}

- Control Plasma P, oppure Dade ® _Ci-Trol ® _{Livello 2, oppure Dade} ® _Ci-Trol ® _{Livello 3}

come controllo per l’intervallo patologico - Pipette di precisione da 0,1 mL - Provette di plastica

- Analizzatore per coagulazione

Raccolta e preparazione dei campioni

Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico (0,11 mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare immediatamente per 15 minuti a 1500 x g, rimuovere il plasma sovranatante e mantenerlo da +15 a +25 °C no all’utilizzo nel test (max. 4 ore). Negli USA fare riferimento al Documen -to CLSI H21-A5, inti-tola-to "Raccolta, Traspor-to e Analisi di Campioni di Sangue per l’Analisi della Coagulazione e l’Esecuzione di Test Coagulativi"3_.

F) Les différents systèmes de mesure (manuel, photo-optique, etc.) montreront une sensibilité variable à l'héparine. L'échange des systèmes de mesure doit être évité. G) Pour déterminer un TCA spécique au patient, il est recommandé de déterminer une valeur de base de TCA pour le patient avant le début du traitement et de la comparer au domaine de référence déni par le laboratoire.

H) Des études ont montré que les propriétés des héparines non fractionnées des diffé-rents fabricants ou provenant de différentes préparations variaient par rapport aux spécications initialement indiquées. La réactivité in-vivo_{du type d’héparine} admi-nistrée varie en fonction du métabolisme du patient et des autres médicaments si-multanément administrés4,6_.

I) Le TCA pouvant varier selon les techniques de travail, les méthodes, les analyseurs, les lots de réactif et l’héparine utilisés, chaque laboratoire doit déterminer ses pro-pres domaines thérapeutiques, et les vérier après chaque changement d’un ou de plusieurs de ces paramètres. Pour ce faire, mesurer simultanément un TCA et une concentration d’héparine sur des échantillons de patients sous traitement à l’hépa-rine. Une analyse de régression permet de déterminer un rapport dose-effet ainsi que le domaine de TCA correspondant à une c oncentration d’héparine comprise entre 0,3 et 0,7 U/ml (obtenue par l’inhibition du facteur Xa)4,6,7_.

Contrôle de qualité interne

Domaine normal : Plasma de contrôle N ou Dade ® _Ci-Trol ® _{niveau 1}

Domaine pathologique : Plasma de contrôle P ou Dade ® _{Ci-Trol niveau 2 ou Dade} ®

Ci-Trol ® _{niveau 3}

Au début de chaque série, à chaque changement de acon de réactif, et au moins toutes les 8 heures de travail, mesurer deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine pathologique/thérapeutique). Traiter les contrôles comme des échantillons de patients. Chaque laboratoire doit déterminer ses propres domaines de conance pour les contrôles. Ils sont généralement de ±2 à ±2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur moyenne du contrôle. Si les valeurs obtenues pour les contrôles sortent de l eur domaine de conance respectif, procéder à une vérication des contrôles, des réactifs et de l’appareil. Il est recommandé de documenter toutes les mesures prises pour identier et résoudre le problème rencontré avant de rendre les résultats des patients. Etablir de nouveaux domai-nes de conance à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle.

Résultats

Les résultats sont exprimés en secondes.

Limites de réalisation du test

La littérature fait état de perturbations du TCA8-10_{. Des doses thérapeutiques d’Hirudin ou}

d’autres inhibiteurs directs de la thrombine peuvent entraîner un allongement des temps de coagulation11_{. Les résultats peuvent également être inuencés par l’anticoagulant choisi}

(par ex. de l’oxalate au lieu du citrate), ainsi que par l’état de l’échantillon (par ex. hémolyti-que, lipémihémolyti-que, alimentation articielle, etc.), tout particulièrement en cas de détermination optique du TCA. Une préactivation de l’échantillon due à la technique de prélèvement peut entraîner de faux résultats. Selon le document CLSI H21-A5 sur le prélèvement et le traite-ment des échantillons, il est recommandé d’utiliser des tubes à essai non mouillables (par ex. en plastique) au lieu de tubes en verre.

Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs an d’optimiser les performances du produit et répondre à ses spécications. Les modications apportées par l’utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la respon-sabilité de l’utilisateur de valider toutes modications apportées à ces instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.

Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.

Domaines de référence

Les intervalles de référence varient d’un laboratoire à l ’autre selon les populations étudiées, ainsi que selon les techniques de travail, les méthodes, les appareils et les réactifs utilisés. Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en fonction des techniques de travail et des méthodes qu’il applique, ainsi que des appareils et des lots de réactifs qu’il utilise, et vérier ses domaines de référence après tout changement d’un des paramètres.

Dans le cadre d’une étude effectuée sur des sujets apparemment sains, les valeurs suivan-tes ont été obtenues avec un lot spécique de Réactif Pathromtin* SL :

médiane 90 % de l’intervalle de référence 5ème_percentile ₉₅ème_percentile

100 échantillons sur Sysmex ® _CA-1500 _{30,9 sec} _{26,4 sec} _{37,5 sec}

111 échantillons sur BCS ® _System _{30,2 sec} _{25,9 sec} _{36,6 sec}

Pour d’autres collectifs de patients, par ex. pédiatriques, il peut être nécessaire de détermi-ner un domaine de référence spécique.

Caractéristiques du test

Précision

Une étude de précision a été effectuée selon un procédé photo-densitométrique sur des plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas héparinés. Les échantillons ont été testés sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8 dosages par jour). Un total de 40 dosages a été effectué. Les coefcients de variation de répétabilité ont été calculés à partir des dosages en quadruple, et trouvés entre 0,6 et 2,0 %. Les coefcients de variation de reproductibilité ont été trouvés entre 0,3 et 2,8 %

Comparaison avec d’autres méthodes

La comparaison des dosages de TCA effectués avec Réactif Pathromtin* SL et de ceux effectués avec un autre réactif TCA a permis d’obtenir pour Réactif Pathromtin* SL un coefcient de corrélation de 0,96, avec une intersection de l’axe des y à 2,1 sec. et une pente de 0,99.

Littérature

Voir la notice d’utilisation en anglais.

* Pathromtin est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol et Dade sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex est une marque déposée de SYSMEX CORPORATION.

Édition juin 2010

(5)

Procedura

Procedura Manuale

Distribuire in una provetta preriscaldata a +37 °C:

Plasma citratato 100 µL

Reagente Pathromtin* SL 100 µL

incubare per 2 minuti a +37 °C

Soluzione di cloruro di calcio (+37 °C!) 100 µL

Dopo l’aggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di mi-sura sull'analizzatore per coagulazione e determinare il tempo di formazione del coagulo.

Monitoraggio della terapia con eparina non frazionata mediante APTT

Quando si utilizza l'APTT per questo scopo, occorre tenere in considerazione i fattori che inuenzano il test. Le considerazioni generali sono elencate qui di seguito.

A) L'orario del prelievo è importante poiché l'emivitain-vivo _{dell'eparina non frazionata} è di circa 1,5 ore4_{. Quando viene somministrata, ha un immediato effetto}

anticoagu-lante, ma il grado di tale effetto diminuisce rapidamente nel tempo. Ciò è particolar -mente evidente per singole somministrazioni venose intervallate.

B) L'anticoagulante utilizzato durante il prelievo del campione può alterare i risultati del test.

C) Il fattore piastrinico 4, un fattore di neutralizzazione dell'eparina rilasciato dagli alfa-granuli piastrinici, viene rilasciato a seguito di aggregazione o danno piastrinico. Per prevenire tale fenomenoin-vitro _{, il campione deve essere prelevato riducendo al minimo il} trau-ma. È noto che le basse temperature inducono aggregazione piastrinica e rilasciano il fattore piastrinico 4; pertanto, per i test sull'eparina, si raccomanda di centrifugare il campione a temperatura ambiente.

D) L'utilizzo dell'APTT per monitorare la terapia con eparina non frazionata dipende dal tempo. Un ritardo nell'analisi dei campioni produce risultati di APTT prolungati. Quindi è basilare che le analisi su tutti i campioni siano eseguite il più presto possibile.

E) Aumentati tempi di attivazione da contatto possono produrre APTT prolungati nel plasma contenente eparina. È basilare che il tempo di incubazione-attivazione della miscela di Pathromtin* SL/plasma sia rigidamente standardizzato5

.

F) Sistemi analitici diversi (manuale, foto-ottico, ecc.) mostrano sensibilità variabile all'eparina. Evitare quindi di scambiare sistemi analitici diversi.

G) Ove possibile, è consigliabile determinare il valore basale dell'APTT di ogni paziente prima di avviare la terapia, al ne di determinare l'APTT di ogni paziente rispetto all'intervallo di riferimento denito per il test nel laboratorio specico.

H) Degli studi hanno mostrato una variabilità nelle stime originali circa la qualità dell'epa-rina non frazionata proveniente da fonti e da produttori diversi. La reattivitàin vivo varia in funzione del tipo di eparina somministrata, del metabolismo del soggetto e della somministrazione concomitante di farmaci4,6_.

I) Poiché il valore di APTT può variare a seconda della tecnica, del metodo, della strumentazione, del lotto di reagente e dell'eparina utilizzati, ogni laboratorio deve stabilire i propri intervalli terapeutici, oppure vericare tali intervalli al variare di una o più delle condizioni citate. Ciò può essere ottenuto determinando simultaneamente l'APTT e la concentrazione di eparina su campioni di pazienti in terapia eparinica. È possibile estrapolare dai dati una curva dose-risposta applicando l'analisi della regressione e determinare l'intervallo di APTT corrispondente a una concentrazione di eparina pari a 0,3 - 0,7 U/mL (tramite un test di inibizione del fattore Xa)4,6,7_.

Controllo di Qualità Interno

Intervallo normale: Control Plasma N, oppure Dade ® _Ci-Trol ® _{Livello 1}

Intervallo patologico: Control Plasma P, oppure Dade ® _Ci-Trol ® _{Livello 2, oppure Dade} ®

Ci-Trol ® _{Livello 3}

Due controlli (uno per l’ intervallo normale e uno per l’intervallo patologico/terapeutico) devo-no essere misurati all’inizio di ogni ciclo analitico, dopo ogni cambio di acone del reagente, e almeno una volta ogni 8 ore. Il materiale di controllo deve essere preparato e processato allo stesso modo dei campioni dei pazienti. Ogni laboratorio dovrebbe denire i propri in -tervalli di accettabilità per i controlli. L’intervallo è generalmente da ±2 a ±2,5 deviazioni standard dal valore medio del controllo. Se i valori dei controlli sono al di fuori dell’intervallo di accettabilità, occorre vericare i controlli, i reagenti e lo strumento. Prima di refertare i valori dei pazienti, si raccomanda di documentare tutte le azioni intraprese per identicare e correggere il problema. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere deniti per ogni nuovo lotto di reagente o di controllo.

Risultati

Il risultato viene dato in secondi.

Limiti della Procedura

Le interferenze per l’APTT sono descritte nei riferimenti bibliograci8-10_{. Dosi terapeutiche di}

irudina o di altri inibitori diretti della trombina possono allungare i tempi di coagulazione11_.

La scelta dell’anticoagulante (es., ossalato invece di citrato) e la condizione dei campioni (es. emolizzati, lipemici, nutrizione parenterale, ecc.) possono inuenzare i risultati. L’ultima condizione vale in particolare per le misurazioni dell’APTT con strumentazione ottica. La preattivazione del campione a causa della tecnica di prelievo carente può portare a falsi risultati. In riferimento alla sezione “Gestione e Raccolta dei Campioni” del documento CLSI H21-A5 si raccomanda di utilizzare provette con parete idrofobica (es. plastica) piuttosto che provette di vetro.

Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare le speciche dei prodotti. Le modiche denite dall’utente non sono supportate da Siemens poiché possono inuire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell’utente validare tutte le modiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens.

I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del pa-ziente, del quadro clinico e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.

Valori Attesi

Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio secondo la popolazione af-uente e secondo la tecnica, il metodo, la strumentazione ed il lotto di reagente utilizzati. Pertanto, ogni laboratorio deve denire i propri intervalli di riferimento o vericarli qualora cambi una o più delle variabili menzionate.

In uno studio su soggetti evidentemente sani utilizzando un lotto specico di Reagente Pathromtin* SL, sono stati rilevati i seguenti valori:

Mediana Intervallo di riferimento al 90% 5° Percentile 95° Percentile 100 soggetti Sysmex ® _CA-1500 _{30,9 sec.} _{26,4 sec.} _{37,5 sec.}

111 soggetti Sistema BCS ® _{30,2 sec.} _{25,9 sec.} _{36,6 sec.}

Anche gli intervalli di riferimento per altre popolazioni quali i gruppi pediatrici devono essere deniti ove richiesto.

Caratteristiche del test

Precisione

Sono state eseguite delle veriche di precisione mediante procedimento di misurazio -ne ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di plasmi epariniz-zati, per 5 giorni, due volte al giorno (n = 8 determinazioni al giorno), per un totale di 40 determinazioni. La precisione intra-ciclo è stata calcolata dai valori di precisione di n = 4 soggetti su cicli quotidiani per 5 giorni. La precisione intra-ciclo è risultata compresa nell’intervallo CV 0,6 - 2,0 %, mentre la precisione inter-ciclo è risultata CV 0,3 - 2,8 %. Confronto tra Metodi

Confrontando i valori di APTT ottenuti con il Reagente Pathromtin* SL e i valori ottenuti con altri reagenti per APTT è stato determinato un coefciente di correlazione di 0,96 con intercetta 2,1 sec. e coefciente angolare di 0,99.

Bibliograa

Vedere le istruzioni per l’uso in lingua inglese.

* Pathromtin è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics. BCS, Ci-Trol e Dade sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics. Sysmex è un marchio registrato di SYSMEX CORPORATION.

Edizione Giugno 2010

Pathromtin* SL

Campos de aplicación

Reactivo para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa) en plasmas humanos citratados.

Signicado diagnóstico

La determinación del APTT con Reactivo Pathromtin* SL es un test rápido para la búsqueda de anomalías del sistema endógeno de la coagulación, que además registra con precisión tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin* SL, en colaboración con plasmas decientes, es apropiado para la determinación individual de los factores del sistema endógeno y para el diagnóstico de la hemolia. Además, también puede emplearse para el control de la terapia con heparina no fraccionada1_.

La medida de APTT está indicada como prueba de detección de los trastornos de la coa-gulación, especialmente antes de intervenciones quirúrgicas, con el n de poder someter a tratamientos preventivos a posibles hemofílicos.

La presencia de inhibidores no especícos, como los anticuoagulantes similares al lúpico, puede pro -longar el APTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es generalmente reconocido como un efecto más relacionado con la naturaleza del reactivo APTT empleado2_.

Principio del método

La incubación del plasma con cantidades óptimas de fosfolípidos y un activador de super-cie conduce a una activación de los factores del sistema endógeno de la coagulación. Mediante la agregación de iones de calcio se desencadena el proceso de coagulación; se mide el tiempo transcurrido hasta la formación de un coágulo de brina.

Reactivos

Nota

Pathromtin* SL puede utilizarse con métodos manuales o en analizadores de coagulación automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a su disposición Guías de Refe-rencia (Hojas de Aplicación) para varios analizadores de coagulación. Las Guías de Referencia (Hojas de aplicación) contienen información especíca sobre el manejo y el procedimiento correspondiente a los analizadores/ensayos que puede diferir de la ofrecida en estas Instrucciones de utilización. En ese caso, la información contenida en las Guías de Referencia (Hojas de Aplicación) reemplaza la información de las presentes Instruccio-nes de utilización. Le recomendamos que consulte también el manual de instruccioInstruccio-nes del fabricante.

Contenido de los envases comerciales 10 x 5 ml,[REF] OQGS 29

20 x 5 ml,[REF] OQGS 35,[REF] 10484200 Composición

Reactivo Pathromtin* SL: Partículas de bióxido de silicio (1,2 g/l), fosfolípidos vegetales (0,25 g/l), cloruro de sodio, HEPES, pH 7,6

Medio de conservación: Azida de sodio (< 1 g/l) Advertencias y medidas de seguridad

1. Sólo para ser utilizado en diagnósticosin vitro .

2. Contiene azida sódica (< 1 g/l) como conservante. La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de cobre y plomo y formar azidas metálicas explosivas. Cuando se eliminen los reac-tivos, enjuagar con agua abundante para evitar la acumulación de azidas, si la eliminación es a través de los desagües sanitarios de acuerdo con la normativa vigente.

Preparación de reactivos

El reactivo Pathromtin* SL, antes de usarse por primera vez, debe resuspenderse invertien-do el frasco de 5 a 8 veces y debe ser usainvertien-do a temperatura ambiente (entre +15 y +25 °C). La resuspensión se debe repetir cada 24 horas, para evitar efectos de sedimentación. Calentar la solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l a +37 °C.