Data collection

La prueba piloto se realizó en Ibagué – Tolima, a campo se llevó: la borra de café recolectada dos meses antes de iniciar con las pruebas de laboratorio, una gramera digital (POCKET

Busca de criaderos

Extracción de larvas Aedes aegypti.

Disposición de especímenes en nuevo recipiente.

Preparación del medio.

Control de Mortalidad

Figura 14. Diagrama metodología en campo

SCALE MH-Series), 10 pipetas, papel filtro para pesar la borra de café, un colador y recipientes plásticos con medidas en volumen. Después de terminar las pruebas experimentales en laboratorio, se eligió el tratamiento T7 (9gr/L) para ser empleado en campo puesto que se observó efectividad larvicida del 99% en un lapso de 24 horas.

3.2.1 Busca de Criaderos de Aedes aegypti.

Se buscó criaderos de Aedes aegypti en lugares abiertos y cerrados. En cinco fincas se registró en recipientes de agua para los bovinos y otros animales, de cinco fincas se encontró criaderos en 2, de las otras 3 fincas no se encontraron criaderos de Aedes aegypti debido a las campañas de salud pública que se han realizado en Ibagué, las personas lavan tanques, albercas y recipientes con agua, alrededor de 1 a 2 veces por semana.

En una de las fincas se encontró un tanque de agua para bovinos al aire libre donde se halló gran cantidad de larvas, también se encontraron larvas de Aedes aegypti en una alberca, en recipiente de agua para mascotas y en floreros.

3.2.2 Extracción de Larvas

En vista de los lugares en los que se encontró las larvas para aplicar el experimento fue necesario retirar las larvas del tanque, las albercas, los recipientes de agua de las mascotas y floreros, posteriormente disponer los criaderos en otros recipientes por medio de un colador, con precaución de no alterar las condiciones en las que se encontró cada uno, se utilizó el mismo medio para realizar los bioensayos.

3.2.3 Disposición en nuevo recipiente.

Se dispuso en diferentes recipientes cada criadero, con agua del medio en el que se halló, respectivamente en baldes con medida de volumen, botellas de gaseosa de 1.5L, 2 L y 620ml, lo cual facilito determinar la medida de agua para agregar la concentración indicada de borra de café.

De acuerdo a la diversidad de estadios, se contó las larvas estadios L3 y L4 este valor se duplicó, para tener un estimado de las larvas estadios L1 y L2, en algunos medios había presencia de pupas, estas no se incluyeron en el conteo de las larvas.

3.2.4 Preparación del medio.

De acuerdo al volumen de agua medida, con embaces de gaseosa, previamente lavados para cada bioensayo, se pesó la borra de café en papel filtro, en la gramera digital. Se tomó como referencia 9gr por cada litro de acuerdo al tratamiento con mayor efectividad en laboratorio, se añadió una cantidad de 1 litro en los bioensayos 1, 2, 3 y 5 para mezclar la borra de café y 100ml para el bioensayo 4, el agua que se utilizó para hacer la mezcla era agua declorada. Bioensayo 1: la cantidad de larvas fueron aproximadamente 500 en el conteo inicial y un volumen de agua de 4 litros, se utilizó un litro de agua adicional para mezclar la borra de café, en total el volumen fue de 5 litros de agua, en los cuales se mezcló 45gr de borra de café. El criadero se halló en un recipiente de agua para mascotas.

Bioensayo 2: se contó 128 larvas inicialmente, estas se encontraron en un recipiente a la intemperie, con volumen de agua de 16 L, para adicionar la mezcla se café y adiciono 1 L de agua declorada, para este bioensayo la cantidad de borra de café empleada fue de 153gr. Las larvas en este recipiente eran de estadio L2 y L3, no se encontró pupas en el recipiente.

Bioensayo 3: en el conteo inicial se encontró 65 especímenes en fase de larva de distintos estadios en su mayoría estadio L4 y algunas pupas. Se separó 1L de agua del estanque donde se halló el criadero en otro recipiente y se sumergieron las larvas, para adicionar la mezcla de borra café empleo 1L de agua declorada, se mezcló 18gr de borra de café en 2L de agua. Bioensayo 4: el criadero de larvas de Aedes aegypti se encontró en un recipiente de 600ml de agua aproximadamente, el conteo inicial fue de 105 de diversos estadios y algunos ejemplares en fase de pupa. Para la mezcla de la borra de café se estimó la cantidad de gramos por medio de una regla de tres figura 14, adicionando 20ml de agua declorada para hacer la mezcla, para un volumen total de 620ml, 9gr es la concentración de mayor efectividad en las pruebas de laboratorio y los 1000ml equivalen a 1Litro.

Figura 15. Ecuación para determinar cantidad de borra de café.

Bioensayo 5: el criadero se halló en un estanque de agua para bovinos, se retiraron los especímenes con una malla y se trasladaron a otro recipiente con 500ml de agua, el conteo

inicial fue de 111 larvas en estadios L3 y L4, la borra de café se mezcló con 500ml de agua para un volumen total de 1Litro de agua.

3.2.5 Evaluación de Mortalidad prueba piloto en campo

Se evaluó el mismo lapso de 72 horas que se empleó en laboratorio, por la misma razón, es el tiempo que tarda una larva estadio L4 para pasar a fase de pupa y una vez en esta fase el efecto de la borra de café no es igual puesto que las pupas no se alimentan. En laboratorio el control se realizó cada 12 horas, en la prueba piloto, el control se realizó cada 24 horas, debido a la dificultad de conteo en el medio por el color café, para determinar la cantidad de larvas muertas, se contó la cantidad de especímenes vivos estadio L3 y L4, este valor se duplicó como se hizo inicialmente.

3.2.6 Análisis de resultados en campo.

Para determinar el tiempo letal medio se empleó la herramienta Probit del programa estadístico IBM SPSS Statistics 20 con el fin de obtener confiabilidad en el tiempo letal medio TL50 para cada bioensayo.