Figura 11. Dispersión de Leptospira hardjo en explotaciones de Ecuador.
Fuente: Maza, 2015.
En la figura 11 se muestran la dispersión o prevalencia por explotaciones de Leptospira hardjo
en Ecuador. 41,97% (CI%95) corresponde a 162 explotaciones positivas al análisis de 386 granjas muestreadas, es importante indicar que se consideró positiva a la unidad productiva que presentara al menos un animal positivo comparado con el reporte por Betancur et al., 2013 quien obtuvo 58,2% y 41,7% de aptitud cárnica y doble propósito respectivamente en fincas de Colombia. Esto puede ser por el contacto cercano entre un animal hospedador infectado y un animal sano en sistemas de crianza natural influyendo en el estado de infección del rebaño. 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 Positivo Negativo 41,97 58,03
43 Mapa 3. Dispersión de Leptospira hardjo en explotaciones de Ecuador.
44
Interpretando los mapas 2 y 3 mayor prevalencia individual se presenta en las provincias de Santo Domingo (20,7%) (CI%95), Pichincha (23,9%) (CI%95) y Manabí (23,5%) (CI%95) mientras tanto la prevalencia por explotaciones las provincias de Santo Domingo (62,9%) y Manabí
(65,1%) (CI%95) presentan una mayor prevalencia de Leptospirahardjoesto que podría ser por
las condiciones climáticas, y principalmente debido al ganado infectado que actúa como reservorio de esta enfermedad, además considerando el subdiagnóstico y la falta de programas de sanidad animal para esta enfermedad (Vijayachari et al., 2008; Verma et al., 2013; Betancur et al., 2013).
45
CONCLUSIONES
La seroprevalencia (16,5%) (CI%95) y prevalencia real de 13,7% (CI%95) determinada
en este estudio, ubica al Ecuador entre los países de Latinoamérica de menor prevalencia.
La dispersión de Leptospira interrogans serovar hardjo en explotaciones del Ecuador
es de 41,97% (CI%95).
El resultado obtenido para la variable aptitud, edad, sexo confirman al ganado bovino
como huésped de mantenimiento primario pudiendo contagiar a nuevos animales que ingresan a la explotación, contribuyendo de esta manera a la epidemiología de la leptospirosis a nivel mundial.
Valores altos de prevalencia de Leptospira hardjo se encuentran en provincias de clima
tropical coincidiendo con la literatura en la cual se describe a la leptospirosis como una enfermedad tropical.
Las Leptospiras patógenas pueden infectar cualquier especie animal. Pero solo un
pequeño número de serotipos será endémica en cualquier región o país en particular.
Además la Leptospira muestra una “nidality natural” (focalidad), y cada serovar
persiste en huéspedes específicos de mantenimiento, consecuentemente, en cualquier región, una especie de animales domésticos será infectado por serovares o especies mantenidas en animales del área (OIE, 2014).
La leptospirosis es una de las enfermedades zoonósicas más extendidas y frecuentes
en el mundo, la epidemiología es reemergente afectando a miles de personas causando en ciertos casos la muerte. Esta infección ocurre por contacto con suelo y agua contaminada; los pequeños mamíferos son uno de los huéspedes de mantenimiento, de esta manera se propaga la enfermedad a los animales domésticos y personas.
La prueba de ELISA permite determinar la prevalencia de cierta enfermedad presente
en una población de manera rápida además de determinar si la infección se encuentra en fase aguda o crónica contribuyendo al diagnóstico clínico diferencial.
46
El conocimiento de los serotipos prevalentes y sus huéspedes de mantenimiento es
47
RECOMENDACIONES
Según los resultados obtenidos, se recomienda lo siguiente:
Notificar al Ministerio de Salud Pública y Ministerio de Agricultura Ganadería y Pesca
sobre la situación epidemiológica de la enfermedad, con el fin de dar a conocer sobre esta enfermedad puesto que está relacionada con la infección a profesionales del sector agropecuario, además, existe un factor de riesgo de infección para personas del sector urbano que practican deportes acuáticos y actividades de contacto con el medio ambiente como el camping.
Continuar con estudios que evalúen los factores de riesgo para Leptospirahardjo con
la finalidad de reunir más información en profundidad sobre el ganado productor de leche y doble propósito del país, de tal manera permita conocer detalles que posiblemente favorecen la transmisión de la leptospirosis tanto individual como intrarrebaño.
Establecer un programa sanitario preventivo como medida de prevención en regiones
que tengan historial de brotes de leptospirosis, además de aplicar planes de control de plagas como los roedores en estas zonas y sus alrededores.
La leptospirosis puede ser controlada de manera efectiva mediante la vacunación
48
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55 ANEXOS
56 ANEXO 1
El análisis serológico de laboratorio sigue el protocolo descrito en la tabla contigua:
1. Preparaciòn de los reactivos •Solución de trabajo del
tampón de dilución (5X)
Diluya 5 veces el tampón de dilución concentrado en agua desmineralizada. (1 volumen de tampón concentrado + 4 volúmenes de agua desmineralizada). •Suero equino (liofilizado). Equilibre el vial a 22 ±3°C y reconstruya1el suero equino con 3.5 ml de agua desmineralizada. El suero equino reconstituido puede mantenerse a -20°C hasta su fecha de vencimiento.
•Tampón de ELISA
Agregue suero equino reconstituido a la solución de trabajo del tampón de dilución hasta lograr una concentración final del 1/100 (v/v).
•Dilución del conjugado. Diluya el conjugado (30X) 1/30 en la solución de trabajo del tampón de dilución.
•Sueros de referencia
Reconstituya los sueros con 0.5 ml de agua desmineralizada. Es conveniente alicuotar y almacenar los sueros reconstituidos a 20°C. Una vez que haya
descongelado los sueros, mézclelos con cuidado y no los vuelva a congelar.
Solución de lavado
•Diluya el líquido de lavado concentrado (200X) en agua desmineralizada. Estabilidad; 1 semana a 22±3°C. 2. Preparación de las muestras y de los sueros analizados. Diluya 1:20 los sueros de referencia 1, 2 y 3 y los sueros del ensayo en una placa sin recubrir. Para ello mezcle 10 µl de suero con 190 µl de tampón de ELISA. 3. Incubación de las muestras •Agregue 100 µl de tampón de ELISA a los pocillos A1 y B1 de la placa de ensayo. •Agregue 90 µl de tampón
de ELISA a los pocillos C1 y H1.
•Agregue 10 µl 1:20 de referencia 1 diluida (=control positivo) a los pocillos C1 y D1.la dilución final debe ser 1:200
•Agregue 10 µl de referencia 2 diluida 1:20 (=control negativo) a los pocillos E1 y F1. La dilución final debe ser 1:200
•Agregue 10 µl de referencia 3 diluida 1:20 (=control positivo débil) a los pocillos G1 y H1. La dilución final debe ser 1:200
•Las muestras de suero pueden titularse realizando diluciones seriadas al medio en tampón de dilución.
•Tape, incubar la placa 60±5 minutos a 37 ±1°C.
4. Incubación con el conjugado y el sustrato
cromógeno (TMB) Lave la placa 6 veces con solución de lavado. Agregue 100 µl de conjugado diluido a
todos los pocillos. Tape e incube la placa 60±5 minutos a 37±1°C. Lave la placa 6 veces con solución de lavado. Agregue 100 µl de sustrato cromógeno (TMB) a todos los pocillos Incube la placa 15 minutos a 22±3°C. Agregue 100 µl de solución de frenado Agite la placa de ensayo para mezclar el
contenido de los pocillos antes de realizar la medición.
57
Sensibilidad del Kit PrioCHECK L.hardjo Ab: 100%
5. Lectura del ensayo y cálculo de los resultados Leer los resultados con un lector de ELISA a una
longitud de onda de 450 nm.
3. Calculo de porcentaje de positividad (PP) de las referencias 2 y 3 y de las muestras del ensayo segùn la siguiente fòrmula. El PP se expresa como la DO450corregida de todas las muestras sobre la media de la DO450corregida del suero de la referencia 1
(pocillos C1 y D1).
PP= � � � � � � �� X 100
6. Interpretaciòn de los resultados.
Criterios de Validación
La media de los blancos (pocillos A1 Y B1) debe ser <0,150. La DO450 corregida de la referencia 1 (pocillos C1 y D1) debe ser ≥ 1,000.
La media del PP del suero de la referencia 2 debe ser <20.
La media del PP del suero de la referencia 3 debe estar comprendida entre 20 y 60. Los resultados de un ensayo específico son válidos solamente si se cumplen los criterios antes
mencionados.
INTERPRETACIÓN DEL PORCENTAJE DE INHIBICIÓN
PP % <20% 20% a 45% >45% Interpretación Negativo Dudoso Positivo
58
Especificidad del Kit PrioCHECK L.hardjo Ab: 96,8%
ANEXO 2
MATERIALES
Kit ELISA para la detección in vitro de anticuerpos
dirigidos contra Leptospira interrogans serovar hardjo
en suero y leche bovina (PrioCHECK® L. hardjo Ab).
Pipetas de precisión mono y multicanal. 10 a 1000 µl Puntas de pipeta desechables. 5-1000 µl
Cilindro graduado de 10 a 1000ml
EQUIPOS
Lector de microplacas
Dispositivos para aplicación y aspiración de solución de lavado. Lavador automático ELISA
Cámara húmeda o incubadora (PST-60 HL). Agitador vortex
59 ANEXO 3
Tabla 1a. Prevalencia de leptospira en Ecuador. Leptospira Frecuencia Porcentaje Válidos Positivo 441 16,5 Negativo 2227 83,5 Total 2668 100 Fuente: El autor
Tabla 2a. Prevalencia de leptospira por sexo.
Sexo
Macho % Hembra % Total %
Leptospira Positivo 51 12,78 390 17,19 441 16,53
Negativo 348 87,22 1879 82,81 2227 83,47
Total 399 100,00 2269 100 2668 100
Fuente: Elautor
Tabla 3a. Prevalencia de leptospira por edad. Edad Hasta 48 % Más de 48 % Total Leptospira Positivo 236 14,74 205 19,21 441 Negativo 1365 85,26 862 80,79 2227 Total 1601 100 1067 100 2668 Fuente: Elautor
Tabla 4a. Prevalencia de leptospira por aptitud. Aptitud
Lechera % Doble Propósito % Total
Leptospira Positivo 255 14,37 186 20,81 441
Negativo 1519 85,63 708 79,19 2227
Total 1774 100,00 894 100,00 2668
Fuente: El autor
Tabla 5a. Dispersión Prevalencia de leptospira en explotaciones de Ecuador.
Leptospira
60
Válidos Positivo 162 41,97 41,97 41,97
Negativo 224 58,03 58,03 100
Total 386 100 100
Fuente: El autor
Tabla 6a. Prevalencia por provincias.
Leptospira
Positivo Negativo Total
Prevalencia por provincias f % f % f % Azuay 18 4,5 384 95,5 402 15,1 Chimborazo 16 7,2 206 92,8 222 8,3 Cotopaxi 29 11,2 230 10,3 259 9,7 Manabí 191 23,5 623 28,0 814 30,5 Pichincha 91 23,9 290 13,0 381 14,3 Santo Domingo 54 20,7 207 9,3 261 9,8 Tungurahua 25 13,2 164 7,4 189 7,1 Zamora Chinchipe 17 12,1 123 5,5 140 5,2 Total 441 16,5 2.227 83,5 2.668 100 Fuente: El autor