Chapter 5 Modelling the LCAP Network
5.2 Modelling the LCAP network structure
1. PLAN DE RECOLECCIÓN
- La planta Mishico (Bidens andicola) es situada y recolectada en el distrito de Limbani de la provincia de Sandia del departamento de Puno.
- La identificación taxonómica de la Planta se realizó en el Laboratorio de Taxonomía Vegetal de la Escuela Profesional de Ingeniería Agronómica de la Universidad Nacional del Altiplano – Puno.
- Los procedimientos empleados para la obtención del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), fueron realizados en el laboratorio de Farmacognosia de la Carrera Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Andina Néstor Cáceres Velásquez – Juliaca, y la determinación de los metabolitos secundarios se realizó en el Laboratorio de Ensayo y Control de Calidad de la Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas de la Universidad Católica de Santa María – Arequipa.
- La evaluación del efecto antibacteriano se realizó en el Laboratorio Microbiológico del Hospital III Juliaca- ESSALUD.
- Cada uno de los resultados obtenidos fueron recolectados en las fichas de reporte de resultados; empleadas para el trabajo de investigación.
2. PROCESAMIENTO DE DATOS
El presenta trabajo de investigación es un estudio experimental y transversal y los resultados (datos) que se obtuvieron han sido procesados mediante los programas del software: Microsoft Word, Microsoft Excel y Programa estadístico SPSS.
El procesamiento y análisis de los resultados obtenidos para el efecto antibacteriano del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) que presenta sobre S. aureus y E. coli de efectuó mediante el Programa SPSS
CAPÍTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos en el desarrollo experimental de la investigación nos ayudan a determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Mishico (Bidens andicola) sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. La obtención de los resultados se dieron de acuerdo a los objetivos planteados, estando en primer lugar la determinación de las características organolépticas del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), la determinación de la composición fitoquímica del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), seguidamente se evaluó el diámetro de los halos de inhibición del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli, en comparación a los antibióticos control, Vancomicina 30ug y Amikacina 30ug respectivamente.
TABLA 1.CARACTERISTICAS ORGANOLÉPTICAS DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola)
CARACTERISTICAS ORGANOLÉPTICAS EXTRACTO ETANÓLICO
COLOR Verde
OLOR Sui generis
ASPECTO Liquido transparente
SABOR Amargo
DETERMINACIÓN DE LA CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS
En la tabla 1 se muestra los resultados obtenidos respecto a las características organolépticas del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), en donde la valoración cualitativa se basó en percepción visual y sensorial del investigador, en donde se obtuvo como resultado, lo siguiente, se observó una coloración verde, olor sui generis, aspecto liquido transparente, y un sabor amargo.
Pudiéndose apreciar similitud con estos resultados en el trabajo de investigación de Tinajero Robalino Mayra Daniela (Ecuador, 2015) en la que señala que las características organolépticas del extracto etanólico de las partes aéreas de la planta Mishico presenta un aspecto líquido, color verde y olor dulce. (18)
TABLA 2. COMPOSICIÓN FITOQUÍMICA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola)
ANÁLISIS RESULTADO
DETERMINACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS Metodología CCF - Terpenos - Flavonoides - Cumarinas - Taninos - Saponinas terpenoidales Negativo a alcaloides
DETERMINACIÓN DE LA COMPOSICIÓN FITOQUÍMICA
En la Tabla 2 se muestra los resultados obtenidos al determinar la composición fitoquímica del extracto etanólico de hojas y tallos del Mishico (Bidens andicola), desarrollado por método de cromatografía en capa fina, en donde se pudo determinar la presencia de terpenos, flavonoides, cumarinas, taninos, saponinas, terpenoidales, y así como también se pudo de determina la ausencia de alcaloides.
Según Rodríguez Quezada, Gamarra Torres y Pérez Azahuanche (Perú, 2011) señalan que en la evaluación fitoquímica de hojas y tallos del Bidens andicola HBK “cadillo” se halló la presencia de esteroides, flavonoides, cardiotónicos y taninos, pudiéndose apreciar similitud con los metabolitos secundarios encontrados en el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) durante la investigación. (7)
Según López Romo, Estefanía Belén (Ecuador, 2016); en el extracto alcohólico de las partes aéreas del Bidens andicola se detectó una escasa presencia de cumarinas, catequinas y saponinas; en este extracto, se pudo determinar la presencia dominante de compuestos fenólicos, flavonoides, y de azucares (15). Al igual que en el trabajo de Pacheco Pacheco, Diana Sthefany (Ecuador, 2018), quien también determino la presencia de metabolitos secundarios de las partes aéreas del Bidens andicola. (54) Según Huarcaya Huarcaya, Liliana y Sotelo Saravia, Nancy Avelina (Perú- Lima, 2018) en el análisis cualitativo del extracto etanólico de las flores de Bidens andicola H.B.K.”quiquo” determinaron la presencia de metabolitos secundarios tales como: compuestos fenólicos, alcaloides, taninos, esteroides y/o triterpenos y ausencia de flavonoides. (14) A diferencia de Anita Solis Q., Lastenia Cutipa Ch., Leoncio Solís Q., Franco Delle Monache (Perú- Cusco, 1991) quienes determinaron la presencia de flavonoides en las flores del Bidens andicola, pudiendo mencionar que se empleó métodos diferentes.
TABLA 3. PROMEDIO DE LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Staphylococcus aureus, A CONCENTRACIONES DE 100%, 75%, 50% Y 25%, DEL CONTROL POSTIVO (Vancomicina 30ug) Y CONTROL NEGATIVO (Etanol 70°)
MUESTRA Staphylococcus aureus
CONCENTRACIÓN DIÁMETRO PROMEDIO
EN (mm) SENSIBILIDAD EXTRACTO ETANÓLICO VANCOMICINA ETANOL 100% 75% 50% 25% 30ug 70° 23 16.8 15 11.2 19.9 6 Sensible Sensible Sensible Resistente Sensible Resistente
GRÁFICO 1. MEDIDA DEL DIÁMETRO DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE MISHICO (Bidens andicola) SOBRE EL Staphylococcus aureus EN COMPARACIÓN CON LA VANCOMICINA
TABLA 4 . PROMEDIO DE LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Escherichia coli, A CONCENTRACIONES DE 100%, 75%, 50% Y 25%, DEL CONTROL POSTIVO (Amikacina 30ug) Y CONTROL NEGATIVO (Etanol 70°)
MUESTRA Escherichia coli
CONCENTRACIÓN DIÁMETRO PROMEDIO
EN (mm) SENSIBILIDAD EXTRACTO ETANÓLICO AMIKACINA ETANOL 100% 75% 50% 25% 30ug 70° 6 6 6 6 22.1 6 Resistente Resistente Resistente Resistente Sensible Resistente
GRÁFICO 2. MEDIDA DEL DIÁMETRO DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE MISHICO (Bidens andicola) SOBRE EL Escherichia coli EN COMPARACIÓN CON LA AMIKACINA
DETERMINACIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Staphylococcus aureus y Escherichia coli.
Evaluación de los diámetros de inhibición
Para evaluar el efecto antibacteriano y certificar la validez de la prueba, se tomó en cuenta los datos referenciales de los halos de inhibición de la Vancomicina 30ug y Amikacina 30ug, así como la escala de Duraffourd.
Se observó halos de inhibición en el caso de los controles (Vancomicina 30ug y Amikacina 30ug), siendo las cepas sensibles a los antibióticos.
En la Tabla 3. Se observan los diámetros de los halos de inhibición que presenta el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) sobre Sthapylococcus aureus.
En el caso de Staphylococcus aureus, el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), presenta diámetros promedios de halos de inhibición sobre el crecimiento de las cepas del microorganismo a las 24h, frente a las concentraciones de 100%, 75%, 50% y 25%, utilizando el método modificado de pozos en agar, observándose que los diámetros del halo de inhibición que presentan son 23mm, 16.8mm, 15mm y 11,2mm, respectivamente, y la Vancomicina 30ug (control positivo) presento un diámetro promedio de 19.9 mm y el etanol 70° (control negativo) 6mm, determinando de que este no tiene ningún efecto sobre el crecimiento del Staphylococcus aureus. Así como también se pudo que observar una diferencia significativa entre cada concentración y que a mayor concentración del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) mayor fue la inhibición. Con los valores obtenidos de los diámetros del halo de inhibición se pudo determinar que el Staphylococcus aureus es sensible al extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) a las concentraciones de 100%, 75% y 50%.
En la tabla 4. Se observan los diámetros de los halos de inhibición que presenta el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) sobre Escherichia coli.
En el caso de Escherichia coli, el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), no presenta diámetros promedio en el halo inhibición sobre el crecimiento de las cepas del microorganismo a las 24h, a las concentraciones de 100%, 75%, 50% y 25%, utilizando el método modificado de pozos en agar, observándose que los diámetros del halo de inhibición que presentan son 6mm, 6mm, 6mm y 6mm, respectivamente, y la Amikacina 30ug (control positivo) presento un diámetro promedio de 22.1 mm, el etanol 70° (control negativo) 6mm, determinando de que tampoco presento efecto sobre el crecimiento de Escherichia coli. Con los valores obtenidos de los diámetros del halo de inhibición del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) se pudo determinar que el Escherichia coli es resistente al extracto
Sin embargo en lo que no concuerda el presente estudio con Rodriguez Quezada, Gamarra Torres y Pérez Azahuanche (2011) es en la determinación del halo de inhibición sobre el Escherichia coli; estos autores usaron partes aéreas de la planta (hojas y tallo) en extracto acuoso y etanólico empleando el método de difusión en agar según los estándares internacionales (Koneman et al 1997), emplearon como patrón referencia la Gentamicina 10ug, obteniendo un halo inhibitorio de 15mm para el extracto etanólico Bidens andicola, más no hubo diámetro de inhibición para el extracto acuoso y 19mm para la Gentamicina 10ug; (7) a diferencia del presente estudio en el que no se obtuvieron diámetros de inhibición sobre cepas de Escherichia coli en cambio la Amikacina 30ug si presento un diámetro promedio de 22.1mm; pudiendo haber factores que modifican los resultados, uno de los cuales podría ser la resistencia de las cepas de Escherichia coli. Por otra parte, el método empleado para extraer principios activos de la planta, el tipo de disolvente y método de preparación, e incluso la misma procedencia
de la planta son factores que pueden influir en efecto antibacteriano de una planta.
Cruz Carrillo Anastasia, Rodríguez N. Natalia, Rodríguez Carlos Eduardo (Ecuador, 2010) en su trabajo de investigación señalan que el Bidens pilosa muestra actividad inhibitoria contra Staphylococcus aureus, comprobándose esto mediante los métodos aplicados en este estudio. En cambio, no mostro actividad inhibitoria sobre cepas de E. coli y P. aeruginosa, ante ninguno de los extractos ensayados en todas las pruebas. Estos resultados tienen similitud con los de este trabajo de investigación, ya que no se registró actividad antibacteriana sobre cepas de E. coli, al igual que el Bidens andicola; pudiendo suponer que los extractos etanólico de la especie Bidens no tienen “actividad sobre bacterias Gram negativas posiblemente, porque las bacterias Gram negativas presentan compuestos anfipáticos que funcionan como bombas de expulsión de múltiples sustancias, por lo cual, el antibacteriano es expulsado de forma rápida, sin poder llegar a cumplir el efecto (Domingo & López, (2003)” (55)
TABLA 5. ESTADISTICOS DESCRIPTIVOS DEL PROMEDIO DE HALOS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) EN COMPARACIÓN CON LA VANCOMICINA
DESCRIPTIVOS DIÁMETRO DE INHIBICIÓN N Media Desviación Estándar Error estándar 95% del intervalo de confianza para la media
Mínimo Máximo Límite inferior Límite superior Vancomicina 30ug 10 19,9000 1,96921 ,62272 18,4913 21,3087 16,00 22,00 E. etanólico - Mishico (100%) 10 23,0000 1,63299 ,51640 21,8318 24,1682 20,00 25,00 E. etanólico - Mishico (75%) 10 16,8000 1,68655 ,53333 15,5935 18,0065 14,00 20,00 E. etanólico - Mishico (50%) 10 14,5000 1,95789 ,61914 13,0994 15,9006 11,00 17,00 E. etanólico - Mishico (25%) 10 11,2000 1,93218 ,61101 9,8178 12,5822 8,00 15,00 Total 50 17,0800 4,50777 ,63750 15,7989 18,3611 8,00 25,00
ANALISIS DE VARIANZA PARA LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) Y LA VANCOMICINA
α = 0.05, gl (4;45) Fc = 62,154 > Ft = 2,58 ANOVA DIÁMETRO DE INHIBICIÓN Suma de cuadrados
Gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 843,080 4 210,770 62,154 ,000
Dentro de grupos 152,600 45 3,391
Pruebas Post Hoc Comparaciones múltiples Variable dependiente: Diámetro de inhibición
HSD Tukey
(I) TRATAMIENTO (J) TRATAMIENTO Diferencia de
medias (I-J)
Desv. Error Sig. Intervalo de confianza al 95% Límite inferior Límite superior
Vancomicina 30ug E. etanólico - Mishico (100%) -3,10000* ,82354 ,004 -5,4401 -,7599
E. etanólico - Mishico (75%) 3,10000* ,82354 ,004 ,7599 5,4401 E. etanólico - Mishico (50%) 5,40000* ,82354 ,000 3,0599 7,7401 E. etanólico - Mishico (25%) 8,70000* ,82354 ,000 6,3599 11,0401 E. etanólico - Mishico (100%) Vancomicina 30ug 3,10000* ,82354 ,004 ,7599 5,4401 E. etanólico - Mishico (75%) 6,20000* ,82354 ,000 3,8599 8,5401 E. etanólico - Mishico (50%) 8,50000* ,82354 ,000 6,1599 10,8401 E. etanólico - Mishico (25%) 11,80000* ,82354 ,000 9,4599 14,1401 E. etanólico - Mishico (75%) Vancomicina 30ug -3,10000* ,82354 ,004 -5,4401 -,7599 E. etanólico - Mishico (100%) -6,20000* ,82354 ,000 -8,5401 -3,8599 E. etanólico - Mishico (50%) 2,30000 ,82354 ,056 -,0401 4,6401 E. etanólico - Mishico (25%) 5,60000* ,82354 ,000 3,2599 7,9401
E. etanólico - Mishico (50%) Vancomicina 30ug -5,40000* ,82354 ,000 -7,7401 -3,0599 E. etanólico - Mishico (100%) -8,50000* ,82354 ,000 -10,8401 -6,1599 E. etanólico - Mishico (75%) -2,30000 ,82354 ,056 -4,6401 ,0401 E. etanólico - Mishico (25%) 3,30000* ,82354 ,002 ,9599 5,6401 E. etanólico - Mishico (25%) Vancomicina 30ug -8,70000* ,82354 ,000 -11,0401 -6,3599 E. etanólico - Mishico (100%) -11,80000* ,82354 ,000 -14,1401 -9,4599 E. etanólico - Mishico (75%) -5,60000* ,82354 ,000 -7,9401 -3,2599 E. etanólico - Mishico (50%) -3,30000* ,82354 ,002 -5,6401 -,9599
Subconjuntos homogéneos Diámetro de Inhibición HSD Tukeya
TRATAMIENTO N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3 4 E. etanólico - Mishico (25%) 10 11,2000 E. etanólico - Mishico (50%) 10 14,5000 E. etanólico - Mishico (75%) 10 16,8000 Vancomicina 30ug 10 19,9000 E. etanólico - Mishico (100%) 10 23,0000 Sig. 1,000 ,056 1,000 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 10,000.
TABLA 6. ESTADISTICOS DESCRIPTIVOS DEL PROMEDIO DE HALOS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) EN COMPARACIÓN CON LA AMIKACINA
DESCRIPTIVOS DIÁMETRO DE INHIBICIÓN N Media Desviación Estándar Error Estándar
95% del intervalo de confianza para la media
Mínimo Máximo
Límite inferior Límite superior Amikacina 30ug 10 22,1000 2,18327 ,69041 20,5382 23,6618 20,00 25,00 E. etanólico – Mishico (100%) 10 6,0000 ,00000 ,00000 6,0000 6,0000 6,00 6,00 E. etanólico – Mishico (75%) 10 6,0000 ,00000 ,00000 6,0000 6,0000 6,00 6,00 E. etanólico – Mishico (50%) 10 6,0000 ,00000 ,00000 6,0000 6,0000 6,00 6,00 E. etanólico – Mishico (25%) 10 6,0000 ,00000 ,00000 6,0000 6,0000 6,00 6,00 Total 50 9,2200 6,57233 ,92947 7,3522 11,0878 6,00 25,00
ANALISIS DE VARIANZA PARA LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) Y LA AMIKACINA
ANOVA DIÁMETRO DE INHIBICIÓN
Suma de cuadrados
Gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 2073,680 4 518,420 543,797 ,000
Dentro de grupos 42,900 45 ,953
Total 2116,580 49
Pruebas post hoc
Comparaciones múltiples
Variable dependiente: HALOS HSD Tukey
(I) TRATAMIENTO (J) TRATAMIENTO Diferencia de
medias (I-J)
Desv. Error
Sig. Intervalo de confianza al 95% Límite inferior Límite superior
Amikacina 30ug E. Etanólico – Mishico (100%) 16,10000* ,43665 ,000 14,8593 17,3407
E. Etanólico – Mishico (75%) 16,10000* ,43665 ,000 14,8593 17,3407 E. Etanólico – Mishico (50%) 16,10000* ,43665 ,000 14,8593 17,3407 E. Etanólico – Mishico (25%) 16,10000* ,43665 ,000 14,8593 17,3407 E. Etanólico – Mishico (100%) Amikacina 30ug -16,10000* ,43665 ,000 -17,3407 -14,8593 E. Etanólico – Mishico (75%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (50%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (25%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (75%) Amikacina 30ug -16,10000* ,43665 ,000 -17,3407 -14,8593 E. Etanólico – Mishico (100%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (50%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (25%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407
E. Etanólico – Mishico (50%) Amikacina 30ug -16,10000* ,43665 ,000 -17,3407 -14,8593 E. Etanólico – Mishico (100%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (75%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (25%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (25%) Amikacina 30ug -16,10000* ,43665 ,000 -17,3407 -14,8593 E. Etanólico – Mishico (100%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (75%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407 E. Etanólico – Mishico (50%) ,00000 ,43665 1,000 -1,2407 1,2407
Subconjuntos homogéneos Diámetro de inhibición
HSD Tukeya
TRATAMIENTO N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 E. Etanólico – Mishico (100%) 10 6,0000 E. Etanólico – Mishico (75%) 10 6,0000 E. Etanólico – Mishico (50%) 10 6,0000 E. Etanólico – Mishico (25%) 10 6,0000 Amikacina 30ug 10 22,1000 Sig. 1,000 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 10,000.
A. CONCLUSIONES
Primera. El extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) presenta efecto antibacteriano in vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus, excepto en cepas de Escherichia coli.
Segunda. Las características organolépticas del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) son descriptivas, pudiéndose observar su aspecto líquido, color verde, percibir su olor sui generis, y sabor amargo.
Tercera. Mediante cromatografía de capa fina se determinó que la composición fitoquímica del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) responsable del efecto antibacteriano está conformada por terpenos, flavonoides, cumarinas, taninos, saponinas terpenoidales.
Cuarta. El extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) al 100%, 75% y 50% es efectivo sobre cepas de Staphylococcus aureus, al igual que la Vancomicina de 30ug. En el caso del E. coli el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), no es efectiva en ninguna de las concentraciones empleadas a diferencia de la Amikacina de 30ug que si muestra efecto antibacteriano.
B. RECOMENDACIONES
Primera. A los estudiantes de la Carrera Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica se les recomienda realizar otros estudios del Mishico (Bidens andicola) sobre diferentes cepas bacterianas para ampliar la información sobre el espectro de la actividad antibacteriana.
Segunda. A los estudiantes de la Carrera Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica se les recomienda preparar diferentes extractos del Mishico (Bidens andicola) con otros solventes para así comparar su efecto antibacteriano y efectividad con el del extracto etanólico.
Tercera. A las autoridades de la Universidad Andina Néstor Cáceres Velásquez se les pide implementar los laboratorios con los materiales y equipos necesarios en la Carrera Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica para lograr un estudio cuantitativo de la composición fitoquímica de diversas plantas con diversas propiedades sean medicinales o tóxicas, además de lograr el aislamiento, identificación, y purificación del principio activo responsable de las diversas propiedades que esta presenta.
Cuarta. A los estudiantes de la carrera Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica se les sugiere realizar un estudio “in vivo” del Mishico (Bidens andicola) para poder determinar la efectividad terapéutica cómo antibacteriano, y evaluar la toxicidad de esta en las diferentes concentraciones empleadas, para poder hallar la dosis terapéutica humana segura y eficaz, siendo para una administración oral y tópico.
C. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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