6.3 Time Randomised Multi-level Caches
6.3.3 Generalising the Latency/Probability Cache Model
3.1. Hematoxilina y eosina
3.1. Grupo ADe acuerdo a los resultados obtenidos con la compresión en placa, no se encontró ninguna célula nodriza en tejidos del grupo ATX (Fig. 12A-B) Mientras que los tejidos del grupo control, mostraron a una célula nodriza en formación, pues la LI aún se encontraba paralelamente a la miofibrilla, además se observó infiltrado celular y la desorganización del tejido muscular (Fig. 12C).
Figura 12. Tinción de Hematoxilina y eosina de tejidos del músculo esquelético del grupo ATX y AC
observada al microscopio óptico.
ATX: Grupo de ratas con 1 día de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 19 posterior a la infección. AC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 19 posterior a la infección por
T. spiralis. A-B: Tejidos de músculo esquelético (masetero y lengua respectivamente) del grupo ATX a 10x. C: Tejido de músculo esquelético (diafragma) del grupo AC a 10x. Imágenes representativas de tejidos de los grupos ATX yAc.
3.2. Grupo B
En los tejidos del grupo BTX se encontraron a células nodrizas con una cápsula delgada y menor definición respecto a la del grupo control, el infiltrado celular fue mayor y se observó en el interior de la célula nodriza (Fig. 13A-B). La célula nodriza del grupo control presentó una cápsula con mayor grosor, y el infiltrado celular se concentró en la periferia (Fig. 12C).
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Figura 13. Tinción de hematoxilina y eosina de tejidos del músculo esquelético del grupo BTX y BC observada al microscopio óptico
BTX: Grupo de ratas con 7 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 25 posterior a la infección. BC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 25 posterior a la infección por
T. spiralis. A-B: Tejidos de músculo esquelético (masetero y pierna respectivamente) del grupo BTX a 10x, C: Tejido de músculo esquelético (diafragma) del grupo BC a 10x. Flecha: muestra un mayor infiltrado celular, cabeza de flecha: se observa mayor grosor de la cápsula de colágena. Imágenes representativas de tejidos de los grupos BTX yBc.
3.3. Grupo C
Se observo leve deformidad de la cápsula en células nodrizas de tejidos del grupo CTX, respecto a tejidos del control (Fig.14A-C), sin embargo, lo más relevante es la observación de aparentemente restos de LI, rodeada por un masivo infiltrado celular (Fig. 14B).
Figura 14. Tinción de hematoxilina y eosina de tejidos del músculo esquelético del grupo CTX y CC observada al microscopio óptico.
CTX: Grupo de ratas con 15 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 32 posterior a la infección. CC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 32 posterior a la infección por
T. spiralis. A-B: Tejidos de músculo esquelético (lengua y pierna respectivamente) del grupo CTX a 40x, C: Tejido de músculo esquelético (diafragma) del grupo CC a 40x. Flecha: señala restos de LI, acompañado por un masivo infiltrado celular. Imágenes representativas de tejidos de los grupos CTX yCc.
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3.4. Grupo D
La mayoría de las células nodrizas se observaron con características similares a las del grupo control, es decir, la LI enrollada al interior rodeada por una cápsula de colágeno de mayor grosor y poca presencia de infiltrado celular (Fig. 15A), aunque en algunos casos se encontraron células nodrizas rodeadas por una intenso infiltrado celular (Fig. 15B).
Figura 15. Tinción de hematoxilina y eosina de tejidos del músculo esquelético del grupo DTX y DC observada al microscopio óptico.
DTX: Grupo de ratas con 30 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 48 posterior a la infección. DC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 48 posterior a la infección por
T. spiralis. A-B: Tejidos de músculo esquelético (diafragma) del grupo DTX a 20x. C: Tejido de músculo esquelético (diafragma) del grupo DC a 20x. Flecha: presencia de masivo infiltrado celular en la periferia de la cápsula, flecha corta: cápsula de colágena de mayor grosor. Imágenes representativas de tejidos de los grupos DTX yDc.
3.5. Grupo E
Similar a DTX, la mayoría de las células nodrizas del grupo ETX mostraron apariencia normal, y en algunos casos se observó un masivo infiltrado celular en la periferia de la cápsula (Fig.16B). Es evidente el aumento de grosor de la cápsula de colágena (Fig.16C).
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Figura 16. Tinción de hematoxilina y eosina de tejidos del músculo esquelético del grupo ETX y EC observada al microscopio óptico.
ETX: Grupo de ratas con 60 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 78 posterior a la infección. EC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 78 posterior a la infección por
T. spiralis. A-B: Tejidos de músculo esquelético (masetero y diafragma respectivamente) del grupo ETX a 20x. C: Tejido de músculo esquelético (diafragma) del grupo EC a 40x. Flecha: presencia de masivo infiltrado celular en la periferia de la cápsula, flecha corta: cápsula de colágena de mayor grosor. Imágenes representativas de tejidos de los grupos ETX y Ec.
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4. Digestión artificial
El paquete larvario se cuantificó para obtener la carga parasitaria de LI/ml. Los resultados son presentados como la mediana y el rango intercuartílico. Se analizaron mediante la prueba de Mann-Whitney, con una p < 0.05 (Fig. 17 y 18, cuadro 4).
Cuadro 4. Comparación de carga parasitaria de grupos que recibieron tratamiento y grupos control
IQR: Rango intercuartílico S: Significativo, α= 0.05 N.S: No significativo
Los resultados muestran una disminución de carga parasitaria significativa para los grupos ATX y BTX, con una p < 0.05. Los grupos restantes tuvieron cargas parasitarias similares respecto a sus controles.
Efecto del tratamiento OXAL® a un día de infección por T. spiralis en modelo murino.
TX A AC 0 500 1000 1500 Grupos de ratas C arga p ar as ita ria (L I/m l)
Figura 17. Efecto del tratamiento OXAL® a siete días de infección por T. spiralis en modelo murino ATX: Grupo de ratas con 1 día de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento, sacrificado al día 19 posterior a la infección por T. spiralis. AC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 19 posterior a la infección por T. spiralis.
Grupos con tratamiento Carga parasitaria LI/ml IQR Grupos control Carga parasitaria
LI/ml IQR p Significancia
ATX - - AC 1250 250 <0.001 p < 0.05
BTX 5625 3750 BC 10000 3130 0.0021 p < 0.05
CTX 8000 2000 CC 7500 2200 0.2453 N.S
DTX 6250 2000 DC 6225 50 0.4636 N.S
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Efecto del tratamiento OXAL® a siete días de infección
por T. spiralis en modelo murino.
TX B BC 0 5000 10000 15000 Grupos de ratas C ar ga p ara si ta ri a (L I/m l)
Figura 18. Efecto del tratamiento OXAL® a siete días de infección por T. spiralis en modelo murino BTX: Grupo de ratas con 7 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 25 posterior a la infección. BC: Grupo de ratas sin tratamiento sacrificado al día 25 posterior a la infección por
T. spiralis.
Mediante la prueba Kruskal-Wallis se compararon las cargas parasitarias de los grupos con tratamiento. Los resultados mostraron diferencias, con una p < 0.0001 (Fig. 19).
Efecto del tratamiento OXAL® sobre la carga parasitaria en grupos de
ratas con diferentes días de infección por T. spiralis
TX A BTX CTX DTX ETX 0 5000 10000 15000 Grupos de ratas C arg a p ara si ta ria (L I/m l)
Figura 19. Efecto del tratamiento OXAL® en grupos de ratas con diferentes día de infección por T. spiralis en modelo murino.
ATX: Grupo de ratas con 1 día de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 19 posterior a la infección. BTX: Grupo de ratas con 7 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 25 posterior a la infección. CTX: Grupo de ratas con 15 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 32 posterior a la infección, DTX: Grupo de ratas con 30 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 48 posterior a la infección, ETX: Grupo de ratas con 60 días de infección por T. spiralis + 3 días de tratamiento y sacrificado al día 78 posterior a la infección.
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5. Microinmunodifusión doble (MIDD)
Para confirmar la respuesta inmune generada por el hospedero se realizó una MIDD. Para ello se tomaron al azar dos muestras de sueros de cada grupo que recibió el tratamiento y paralelamente se utilizó un control positivo y un control negativo.
Los sueros del grupo ATX no formaron banda de precipitación; esto nos indica que en este grupo no se generó una respuesta inmune. Por el contrario, los sueros de los grupos BTX, CTX, DTX y ETX, si formaron banda de precipitación, ya que los anticuerpos generados ante la infección, interaccionaron con el AST (Fig. 20).
Figura 20. MIDD de sueros de ratas que recibieron tratamiento a diferentes días de evolución de infección por
T. spiralis en modelo murino
A1-A2: Sueros del grupo ATX, B1-B2: Sueros del grupo BTX, C1-C2: Sueros del grupo CTX, D1-D2: Sueros del grupo DTX, E1-E2: Sueros del grupo ETX, (+): control positivo, (-): control negativo, AST= antígeno soluble total de T. spiralis.
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