Reminder 77!

La clasificación de las inmunotoxinas se puede realizar en función de la composición de cada uno de los dominios. Por parte del dominio marcador, además de los anticuerpos anteriormente descritos, se han utilizado otras moléculas, como interleuquinas y factores de crecimiento, que permiten la interacción con proteínas específicas de las células objetivo (Foss et al., 2000; Chen et al., 2018; Cheung et al., 2019). Mientras que, en relación al dominio tóxico, si bien principalmente se han utilizado toxinas proteicas procedentes de bacterias o plantas, en los últimos años el uso de enzimas humanos se ha extendido gracias a sus ventajas de pequeño tamaño, alta estabilidad en suero y baja inmunogenicidad (De Lorenzo & D’Alessio, 2008; Krauss et al., 2008).

Sin embargo, dentro de los diferentes tipos de inmunotoxinas que han sido descritos en la literatura, la naturaleza y tipo de toxina incluida en su dominio tóxico ha variado enormemente. Entre ellas, destacan la exotoxina A de Pseudomonas y la toxina diftérica, entre las de origen bacteriano, las actinoporinas producidas por anémonas o la Gelonina A y la ricina de origen vegetal entre otras (Avila et al., 1998; Foss et al., 1998; LeMaistre et al., 1998; O`Toole et al., 1998; Schnell et al., 1998; Tejuca et al., 2009; García-Ortega et al., 2011; Wang et al., 2011; Fuchs et al., 2013; Liu et al., 2013; Rivera et al., 2019).

Como se ha mencionado anteriormente, muchas de estas toxinas se asociaron con la aparición de efectos adversos, fundamentalmente por su inmunogenicidad o relación con el síndrome de fragilidad vascular (VLS) (Mazor et al., 2016; Baluna & Vitetta, 1997). En la búsqueda de proteínas que cumplieran los requisitos exigidos, se han desarrollado diversas construcciones entre las que destacan aquellas cuyo dominio tóxico está constituido por Ribonucleasas de distintos orígenes, denominándose inmunoRNasas (Jones et al., 2016; Olombrada et al., 2017).

3.5.1.- InmunoRNasas

Las ribonucleasas (RNasas) son un conjunto de enzimas cuyos miembros presentan una diversidad enorme a nivel de función y estructura (Aravind & Koonin, 2001), y cuya característica común es su capacidad para romper enlaces fosfodiéster entre ribonucleótidos. Estas enzimas participan en gran variedad de procesos como la degradación y maduración del RNA celular, el silenciamiento génico o la traducción génica, entre otros (D’Alessio et al., 1997; Beintema et al., 1998; Bernstein et al., 2001; Nelson et al., 2003; Carmell et al., 2004).

Las ribonucleasas son producidas por todos los seres vivos, desempeñando distintas funciones, pudiendo ser intracelulares o extracelulares, secretadas por el organismo productor. Así, su función está relacionada con su localización, pudiendo participar en la defensa del organismo productor o en la

degradación de RNA exógeno para la obtención de bases nitrogenadas y fosfato (Macintosh et al., 2001, Deshpande et al., 2002).

En los últimos años, las ribonucleasas han ido adquiriendo mayor protagonismo debido a que poseen muchas de las características que se busca para un dominio tóxico de una inmunotoxina. (De Lorenzo & D’Alessio, 2008; Krauss et al., 2008; Balandin et al., 2011; Boriello et al., 2011; Tomé-Amat et al., 2012; Shirmann et al., 2014; Sun et al., 2018) (Figura I12).En particular, las ribotoxinas

Figura I12. Representación tridimensional de RNasas

utilizadas como dominio tóxico en inmunoRNasas. Diagramas generados con el programa MOLMOL (Koradi et al., 1996).

destacan entre la familia de las ribonucleasas extracelulares fúngica por su pequeño tamaño, alta termoestabilidad y resistencia a las proteasas, baja inmunogenicidad, y especialmente por su alta capacidad para inactivar los ribosomas.(Wawrzynczak, et al., 1991; Rathore et al., 1997; Rathore & Batra, 1997a; Carreras-Sangrà et al., 2012; Walsh et al., 2013; Tomé-amat et al., 2015b; Jones et al., 2016; Olombrada et al., 2017).

Esta clase de inmunoconjugados tiene como diana elementos intracelulares que contienen RNA, como pueden ser los mRNA, tRNA o los ribosomas. A las RNasas que tienen como diana estos últimos se les conoce como ribotoxinas, formando un grupo muy prometedor debido a su alta eficacia como efectores citotóxicos (Ardelt, 2013), que se combinan con los últimos diseños de dominios marcadores para mejorar sus prestaciones en su aplicación clínica (Rust et al., 2017).

El mecanismo general de las inmunoRNasas se basa en varias fases: Interacción con el antígeno específico de la célula diana, endocitosis y transporte intracelular del complejo antígeno-InmunoRNasa, translocación del dominio tóxico al citosol, actividad citotóxica y muerte celular (Figura I13). Diversos estudios han indicado que una de las principales etapas limitantes para la eficacia

citotóxica es la ruta intracelular que siguen los complejos una vez internalizados, que condicionan la liberación de la parte efectora, y, por tanto, que puedan realizar su actividad letal (Weldon & Pastan, 2011; Weng et al., 2012; Fuchs et al., 2013; Pasetto et al., 2015).

Dependiendo de las propiedades del dominio tóxico, su liberación se puede producir en el transcurso de estas etapas. Si tiene la capacidad de interaccionar con membranas, se podrá liberar en fases tempranas, mientras que, si no posee esta capacidad, se acumulará en los lisosomas, donde será degradada total o parcialmente.

Figura I13. Representación del mecanismo general

de internación de las inmunoRNasas. Se representa los distintos orgánulos implicados, así como la secuencia de los pasos que siguen el complejo desde el reconocimiento antigénico su liberación en el citoplasma donde tiene lugar su actividad citotóxica, que provoca la muerte celular.

Por este motivo, el tráfico intracelular puede ser considerado como la etapa limitante para el efecto citotóxico de la inmunoRNasa, ya que su eficacia viene condicionada por la liberación del dominio tóxico al citosol para ejercer su actividad letal

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