Resolution: A New Psychological Construct

las diferentes zonas de desarrollo de la raíz.

Los experimentos de RNAseq fueron realizados sobre muestras puntas de raíces de plantas luego de un tratamiento de dos horas con dex. La elección del tiempo de tratamiento se basó en resultados previos, que mostraban que los sistemas inducibles eran capaces de regular la expresión de genes a estos tiempos y en la posibilidad de que al hacer tratamientos cortos se pudieran encontrar genes regulados a nivel transcripcional por la acción directa del sistema GRF/GIF sobre sus secuencias regulatorias.

Realizamos la comparación de las listas de genes obtenidas por los experimentos de transcriptómica en raíces de plantas 35S:miR396 (149) y los sistemas inducibles AN3-GR-GFP y rGRF3-GR-GFPutilizados en esta tesis, con la intensión de identificar genes cuya expresión responda a los niveles deAN3yGRF3. En la intersección de la lista de genes cuya expresión se ve aumentada en las plantas 35S:miR396 y disminuida en ambas líneas inducibles, se obtuvieron 61 genes (Figura R3.13). Dentro de los genes que se encuentran en esta intersección encontramos a los genesPLT1y PLT2, los genes que codifican a los péptidos regulatorios (GLV3,GLV6,GLV9) como así también a las enzimas que participan en su procesamiento (SBT1.3) y los receptores que los censan (RGI2,RGI5) (Figura R3.13). Esto indica que estos genes serían candidatos a ser regulados de manera directa por el sistema GRF/GIF.

Figura R3.13. Búsqueda de genes regulados a nivel transcripcional de forma directa por el complejo GRF/GIF. (A) Diagrama que representa el solapamiento entre las listas de genes inducidos en muestras de puntas de raíces35S:miR396y reprimidos en las muestras de raícesan3 x AN3-GR-GFPy35S:miR396 x rGRF3-GR-GFPluego de dos horas de inducción con dex. Los 61 genes en esta intersección serían putativos blancos de regulación directa por AN3 y GRF3.

Un trabajo reciente ha mostrado que PLT2 se une directamente a secuencias regulatorias en AN3,GRF2y GLV6para inducir su expresión en las células en activa proliferación celular (130). Con estos componentes proponemos la participación del sistema miR396/GRFs/GIFs, las hormonas peptídicas de la familia GLV y los genes PLT en una red regulatoria de retroalimentación que terminaría por definir las diferentes zonas de desarrollo a lo largo del eje longitudinal de la raíz (Figura R3.14). En esta red regulatoria PLT activaría al complejo GRF/GIF en las TACs, a continuación el complejo GRF/GIF contribuiría a dar forma al gradiente de expresión de los genes PLTs en dos niveles; en primer lugar a través de la regulación negativa de la transcripción de los genesPLTsy; en segundo lugar de forma indirecta impedirían la estabilización de la proteínas PLTs al disminuir los niveles activos de los péptidos GLVs, junto con las enzimas que los procesan y los receptores que los censan (Figura R3.14).

Figura R3.14. Red regulatoria identificada entre miR396/GRFs/GIFs, los péptidos GLVs, y los genesPLTque contribuye a definir las diferentes zonas de desarrollo a lo largo del eje longitudinal de la raíz.. La línea punteada que une a los GLVs con PLT se refiere a la estabilización proteica de PLT por acción de los mismos. El SCN, se encuentra delineado en Rosa.

Teniendo en cuenta la respuesta rápida de los genesPLTsyGLVsluego de la inducción deAN3 y GRF3, los mismos podrían ser blancos directos de este sistema. De acuerdo con esta hipótesis, los datos del Cistroma de Arabidopsis generados a partir de hojas jóvenes (150), muestran sitios de unión de un GRF a posibles secuencias regulatorias sobre el promotor de PLT1 y en el tercer intrón de GLV6.

Si consideramos que AN3 es capazde interaccionar, además de con los GRFs, con otras proteínas, incluyendo componentes de la maquinaria de remodelación de la cromatina y variados factores de transcripción (25, 32) una hipótesis posible es que GRF3 se una a un subgrupo de los sitios a los que se une AN3. En ese caso, sería interesante estudiar los genes blanco de regulación transcripcional directa por AN3 en plantas con deficiencias en los GRFs. También, sería interesante evaluar la posibilidad de que AN3 pueda reconocer a un mismo gen blanco de regulación directa en dos sitios diferentes, uno de esos sitios reconocido a través de la formación del complejo con los GRFs y el otro a través de la interacción con otras proteínas, que puede ser BRM u otro factor de transcripción. Esta hipótesis daría cuenta de la dualidad de función de AN3 que describimos en el

capítulo 2 de esta tesis. AN3 formando un complejo con los GRFs, actuaría como represor de genes característicos de SCN en las TACs, incluyendo los genesPLTsyGLVs. Mientras que en el SCN donde los GRFs no se expresan, podría formar un complejo con otras proteínas, incluida BRM, y actuaría como activador de los mismos genes. En concordancia con esta posibilidad, encontramos que la intersección de las lista de genes que dan señal en el ChIP de AN3 llevado a cabo con cultivos celulares (32) con los genes que dan señal en el ChIP de BRM realizado con plántulas completas (151) da como resultado que un 50% de los genes que presentan sitio de unión para AN3 también son reconocidos de manera directa por BRM.

De la misma manera sería interesante estudiar aquellos genes blanco regulados porGRF3que no lo son por AN3, de manera de encontrar posibles funciones de los GRFs independientes del cofactor. Este tipo de estudios mostrarían que el efecto de los GRFsy losGIFsactuando juntos o de forma independiente en la regulación de la expresión génica sería más complejo de lo que previamente se supuso.