Threats to Validity

Sin duda todos los efectos descritos en el apartado 1.3.9., pueden alterar el proceso reproductivo, pero ¿Cuáles son los efectos del BPA durante la meiosis? Los efectos del BPA en la primera profase han sido estudiados por un grupo muy reducido de investigadores. De hecho, solo se han publicado dos trabajos que muestran el efecto de BPA en ovocitos de ratón (Hunt et al., 2003; Susiarjo et al., 2007) y otro estudio que muestra los efectos en C. elegans (Allard y Colaiácovo, 2010). A continuación se describen los resultados publicados por estos investigadores. Los primeros estudios publicados por el grupo de Hunt et al., (2003) demostraron un incremento en la tasa de aneuploídias y abortos tempranos en ratas expuestas de manera accidental a BPA. Posteriormente a la exposición accidental, los autores evaluaron los efectos del BPA al exponer a ratones a dosis orales de entre 20ng/g y 100ng/g. Los autores observaron que los ovocitos de animales expuestos a BPA presentaron un incremento del 40% en los errores

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apareamiento y sinapsis así como un incremento del 5.8% en las anormalidades numéricas de los ovocitos (hiperploides).

Las observaciones realizadas en el primer estudio de Hunt et al. (2003) desembocaron en la realización de un segundo trabajo del mismo grupo (Susiarjo et al., 2007). En este trabajo se estudió el efecto del BPA en animales expuestos a BPA mediante la evaluación del apareamiento y sinapsis así como la recombinación. Los errores de apareamiento y sinapsis del tipo uniones end-to- end se incrementaron en un 25.6% en los ovocitos expuestos a BPA. Por otro lado, los autores describieron un incremento del 8.9% en el número de puntos de recombinación (detectados mediante la proteína MLH1) en ovocitos expuestos a BPA, así como un incremento en los quiasmas. En este mismo estudio, empleando animales modificados genéticamente para evitar la expresión del ERβ describieron que los animales presentaban las mismas alteraciones observadas en aquellos que habían sido tratados con BPA. En este sentido, los autores concluyeron que el efecto del BPA en ovocitos se relaciona con efecto antiestrógeno del compuesto sobre los receptores β.

Recientemente, Allard y Colaiácovo (2010) han descrito el efecto del BPA sobre el proceso de gametogénesis en C. elegans. Los autores observaron una disminución en la viabilidad de los ovocitos, retraso y acumulación de los ovocitos en etapas tempranas de la profase, tasas altas de aneuploídias e infertilidad. Por otro lado estos autores describieron una alteración en la actividad de la proteína RAD51 implicada en la reparación de las rupturas de doble cadena. Finalmente estos autores al igual que Susiarjo et al., (2007) concluyeron que el efecto observado en los ovocitos podría esta mediado por un efecto anti-estrógeno del BPA mediado a su vez por el bloqueo de la actividad de receptores de tipo β.

41 2. OBJETIVOS.

El BPA es un compuesto que se produce y se emplea anualmente en grandes cantidades. Debido a su amplio uso en la producción de artículos empleados en alimentación, juguetes, odontología y biberones, se considera que es un compuesto al cual estamos expuestos de manera continuada.

Estudios realizados en los Estados Unidos de Norte América han demostrado que el 90% de los adultos tienen valores detectables de este compuesto en sangre y orina. Las mujeres embarazadas así como los neonatos son un grupo particular de estudio ya que en ellos se duplican lo valores descritos en adultos tanto en sangre como en orina. En este sentido, es importante señalar que los productos “derivados de la gestación” (líquido amniótico, placenta y leche materna) pueden presentar valores hasta 10 veces más altos.

Los efectos del BPA como disruptor hormonal se han estudiado en diferentes modelos de animales así como en cultivos de líneas celulares tanto de humanos como de animales. Sin embargo, los efectos a nivel reproductivo siguen siendo un punto de debate dentro de la comunidad científica. Se ha demostrado que el BPA produce alteraciones en la estructura y función de los ovocitos provenientes de tejido ovárico adulto pero en el caso específico de ovocitos fetales, solo existen unos pocos reportes sobre sus efectos. De hecho los estudios realizados para evaluar los efectos del BPA en ovocitos en profase I han demostrado que tanto en C. elegans como en ratón, este producto afecta el correcto desarrollo de los procesos de apareamiento, sinapsis y recombinación, con las consecuencias que, de ellos, puedan derivarse en las células germinales resultantes.

En este sentido, si en animales de experimentación existe poca información, en ovocitos fetales humanos es inexistente. Las características de la gametogénesis femenina en mamíferos incluyendo al humano, en la cual el proceso reproductivo se inicia durante la vida fetal han limitado aún más su estudio. Durante este período se desarrollan diferentes procesos celulares, y sin duda la primera profase meiótica es uno de los más importantes. El correcto desarrollo de los eventos de apareamiento, sinapsis y recombinación durante la profase I permite que durante la edad reproductiva se tengan ovocitos con las características necesarias para ser aptos en el proceso reproductivo. La alteración de estos procesos se relaciona con anormalidades en la segregación, aneuploídias y en general con trastornos en la vida reproductiva de la mujer.

De esta manera el objetivo de este trabajo es valorar los efectos del BPA sobre los procesos de apareamiento, sinapsis y recombinación en el ovocito fetal humano expuesto al BPA tanto a nivel citogenético como a nivel de expresión génica.

De esta manera, los objetivos planteados durante el desarrollo de este trabajo de tesis doctoral han sido:

42 Objetivo general:

Determinar los efectos tóxicos del BPA en ovocitos fetales humanos cultivados in vitro. Objetivos específicos:

1. Desarrollar un modelo de cultivo in vitro que permita:

• la progresión meiótica de los ovocitos fetales humanos in vitro. • la recombinación meiótica de los ovocitos fetales humanos in vitro.

2. Evaluar el efecto del BPA en ovocitos fetales humanos cultivados in vitro, con respecto a: • la progresión meiótica de los ovocitos fetales humanos in vitro.

• la recombinación meiótica de los ovocitos fetales humanos in vitro. 3. Evaluar la expresión génica de los ovocitos fetales humanos in vitro en:

• Ovocitos fetales humanos en cultivo no expuestos a BPA. • Ovocitos fetales humanos en cultivo expuestos a BPA.