Pruebas de campo químico para la sangre: existen varios métodos de análisis de sangre estas pruebas son de orientación o presuntivas son muy sensibles pero poco específicas porque además de la sangre, hay otras muchas sustancias que son capaces de dar un resultado positivo al ser sometidas a las mismas, por lo que sólo se puede valorar un resultado negativo.
Es probable que muchos productos produzcan manchas similares a la sangre, pero no responden a los reactivos de análisis de sangre. El más comunes de esos productos son: huevos, leche, vinos, refrescos de cola, orina, heces, semen, jugo de tomate, mayonesa, café, óxido de hierro, tintas, tabaco, jugo de naranja, la mayoría de los otros productos alimenticios y la mayoría de los productos químicos / farmacéuticos. Entre las pruebas de campo químico más comunes son: luminol, prueba de kastle-meyer, técnica de leuco
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malaquita verde y otros. Las pruebas de campo de las manchas secas en la escena del crimen a menudo son esenciales para localizar y hacer presunciones preliminares identificación de sangre.
3.1.Luminol
El luminol es un compuesto quimioluminiscente que consiste en provocar la producción de luz por parte de las peroxidasas presentes en la muestra, se usa como una prueba presuntiva para detectar la presencia de sangre. Mediante el uso de la actividad tipo peroxidasa de la parte hemo de la hemoglobina, luminol produce una luz blanca azulada que puede verse en la oscuridad absoluta.
Sí el test es positivo, se ve una luminiscencia blanco-azulada, que debe ser observada en la oscuridad. Esta prueba es muy útil cuando las manchas son difíciles de ver, cuando se encuentran en superficies oscuras o zonas que han sido lavadas. El luminol no destruye la mancha y no interfiere en el caso de que se realicen después otras pruebas de confirmación o serológicas, no interfiere en las pruebas de ADN que posteriormente se realicen sobre ella (Negre Muñoz, et.al,2003).
3.2.Técnica de la fenolftaleína o de kastle-mayer
La prueba de Fenolftaleína es la más específica de todas las pruebas catalíticas y es comparativamente tan sensible. Este reactivo depende de la presencia de hemo o hemoglobina como catalizador para producir una reacción positiva (Carreño Rios, 2006).
3.3.Técnica de leucomalaquita verde
Se basa, en una reacción de oxidación y reducción la estructura química de esta sustancia recuerda a la de la fenolftaleína, el prefijo leuco se refiere a la forma reducida incolora; la forma leuco puede ser preparada por reducción de la malaquita verde (www.sirchie.com, 2016).
Pruebas de certeza, se basan en comprobar la presencia en la muestra de alguno de los componentes de la sangre. Estas pruebas no permiten determinar si la sangre analizada es o no humana.
Figura 4.Pruebas orientativas: Fenolftaleína Rosado rojo, Leuco-Malaquita Azul verde, Luminol (en la
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Pruebas orientativas: Fenolftaleína Rosado rojo, Leuco-Malaquita Azul verde, Luminol (en la oscuridad) Luminiscencia azul / blanca.
3.4.Técnica de certeza test de identificación rápida de manchas de sangre humana RSID
La técnica de elección para determinar si una mancha de sangre es de origen humano
El test de identificación rápida de manchas (RSID, siglas en inglés de ―Rapid stain identification‖), es una prueba cualitativa de detección de fluidos biológicos con base inmunológica que fue diseñada específicamente para uso forense. Esta prueba específica para sangre humana (que no presenta reacción falso positiva ni siquiera con sangre de chimpancé, especie más cercana al ser humano), puede cualitativamente registrar un resultado positivo o negativo basándose en la presencia o ausencia de una línea roja sobre una membrana donde se han fijado dos anticuerpos monoclonales murinos específicos para la glicoforina A humana.
Una vez que el fluido testeado se coloca en la ventana de muestra, el buffer de corrida y la muestra se difunden a través de la almohadilla conjugada, re-disolviendo los anticuerpos conjugados con oro coloidal. Si la glicoforina A humana está presente en la muestra, se forma un complejo antígeno-anticuerpo-oro coloidal. Así, los anticuerpos anti-glicoforina A inmovilizados en la línea de prueba (T), capturan el complejo de antígeno glicoforina A – anticuerpo – oro coloidal, produciendo una línea roja en posición de la línea de prueba. Si se trata de una glicoforina A no humana, el complejo glicoforina A – anticuerpo – oro coloidal no se formará y el oro coloidal no se acumulará en la línea de prueba. Por otro lado, el anti-ratón IgG en la línea control (C) captura los anticuerpos de ratón produciendo una línea en la posición del control. Esto demuestra que el fluido de la muestra fue transportado y que los componentes de la prueba trabajan correctamente.
La sensibilidad de esta prueba permite la detección de hasta 1 µl de sangre, mostrando en diversas investigaciones, una sensibilidad superior en comparación con otras pruebas,
Figura 5.Prueba RSID-Sangre examen de posibles trazas de sangre, prueba confirmatoria para establecer
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considerándose volúmenes de sangre humana entre 0,01 y 5,0 µl (Schweers, et al. 2008; Sinelnikov, et al. 2013).
Se usó el programa de ImageJ para el análisis de los resultados este programa tiene la finalidad de analizar imágenes como medir áreas, pixeles, contar objetos, cuantificar la señal etc. (Benito A. , 2006).
Este programa nos ayuda a realizar un análisis de los resultados de cada imagen obtenida con la finalidad de cuantificar la señal y estos datos de la imagen se muestran en histogramas y se registran en X el valor de grises, en Y la distancia de pixeles que tienen un determinado valor (Darío K. , 2011).