Las muestras utilizadas para este trabajo de investigación se obtuvieron de dos fuentes diferentes, las cuales son: muestras impregnadas con sangre de data antigua en diferentes sustratos almacenadas a temperatura ambiente (muestras conservadas, custodiadas e históricas cubre montura perteneciente al Mariscal Sucre) y muestras impregnadas con sangre en un sustrato de algodón inducidas a degradación sometidas a estrés térmico, radiación UV-ionizante, humedad en la cámara de degradación, además de usar dos grupos de muestras control A(Muestras de sangre fresca procesadas para la tesis), control B (Muestras proporcionadas y procesadas anteriormente en laboratorio).
4.1.1. Muestras Controles
La muestra de sangre humana se obtuvo por punción venosa en tubo vacutainer con anticoagulante EDTA etiquetados con el código utilizado para pruebas procesadas en laboratorio PI (Prueba de identidad), con su numeración respectiva para identificar cada muestra fresca de sangre, posteriormente se procesaron las muestras.
Figura 22.Preparación de las muestras de sangre inducidas dentro de la cámara de degradación(Fuente:
63
Tabla 3. Muestras control utilizados en el trabajo de investigación con los diferentes marcadores.
ORIGEN CÓDIGO Nº MUESTRA SUSTRATO ANTIGÜEDAD
CONTROL A
PI
1354
SANGRE FRESCA PROCESADAS PARA LA TESIS 1343
1372 1373 CONTROL B
1395
ELECTROFEROGRAMAS PROPORCIONADAS POR CINGEN 1383 1388 1392 1432 1394
Las manchas de sangre presentes en diferentes sustratos descritas con su respectivo código PI de la siguiente tabla fueron procesadas de 3-5 días después de la toma de muestra.
4.1.2. Muestras almacenadas a temperatura ambiente
Preparación de muestras
La muestra de sangre humana se obtuvo por punción venosa en tubo vacutainer con anticoagulante EDTA etiquetados con el código CG-MA(Centro de Investigación Genética -Muestra Antigua), con su numeración respectiva para identificar cada muestra, posteriormente se prepararon fragmentos de diferentes soportes los cuales son: tela de algodón, lino, tocuyo, aguayo , oveja con tinte rojo, oveja beis , oveja café, llama café, sintético celeste, fibra beis donde se depositaron 100 μl de sangre en los diferentes sustratos mencionados, los mismos de una dimensión de 3 cm de ancho por 3 cm de alto, se dejaron secar y se guardaron a temperatura ambiente en las instalaciones del mismo laboratorio.
Tabla 4. Muestras de manchas de sangre adheridos en diferentes sustratos conservadas a Tº
ambiente.
CÓDIGO Nº MUESTRA SUSTRATO ANTIGUEDAD
CG-MA 2 SANGRE ALGODÓN 2 AÑOS 3 LINO 4 TOCUYO 5 AGUAYO 6 OVEJA ROJA 7 OVEJA BEIS 8 OVEJA CAFE 9 LLAMA CAFE 10 SINTÉTICO CELESTE 3 AÑOS 11 SINTETICA BEIS
Las manchas de sangre presentes en diferentes sustratos descritas con su respectivo código CG-MA (Cingen Muestra Antigua) de la siguiente tabla fueron almacenadas a temperatura ambiente durante un intervalo de 2-
64 4.1.3. Muestras CINGEN IITCUP
Las muestras custodiadas proporcionadas por el IITCUP pertenecen a diferentes casos forenses.
Tabla 5. Muestras de custodiadas de manchas de sangre de data antigua.
CÓDIGO Nº MUESTRA SUSTRATO ANTIGÜEDAD
CGMA 1 SANGRE ALGODÓN 3 AÑOS 25 GUANTE ALGODON 12 ALGODON 5 AÑOS 15 POLERA 16 CHOMPA 28 TOCUYO 17 AÑOS
Muestras custodiadas proporcionadas por el IITCUP descritas con su respectivo código CG-MA de la siguiente tabla fueron almacenadas a temperatura ambiente durante un intervalo de 3 a 17 años.
4.1.4. Muestras Históricas (Cubre- Monturas perteneciente al Mariscal Sucre)
Muestra de la gualdrapa impregnada presuntamente con manchas de sangre perteneciente al uno de los presidentes de Bolivia el Mariscal Antonio José de Sucre, la pieza (cubre monturas), data de 189 años de antigüedad esta prenda se encuentra conservada en el Museo de la Casa de la Libertad-Sucre-Bolivia.
Tabla 6. Muestras del cubre monturas del Mariscal Sucre proporcionadas por la Casa de la
Libertad.
CÓDIGO Nº MUESTRA SUSTRATO ANTIGÜEDAD
CG-MA 18 SANGRE LINO 189 AÑOS 19 BIOLÓGICO 20 SIN SANGRE
Las manchas de sangre presentes con su respectivo código CG-MA (Cingen Muestra Antigua) Muestras proporcionadas por el Museo Casa de la Libertad con una data antigua de 189 años.
4.1.5. Obtención de las muestras inducidas a degradación.
La muestra de sangre humana se tomó por punción venosa en tubo vacutainer con anticoagulante EDTA, posteriormente se prepararon sustratos de algodón de 3 cm de ancho por 3 cm de alto donde se depositaron 100 μl de sangre.
65
Se fabricó una cámara de inducción a degradación introduciendo soportes de algodón impregnados con sangre, aplicando el diseño experimental estas muestras fueron sometidas a factores de tiempo, temperatura, humedad relativa y luz UV. Las características de la cámara temperatura y humedad que se utilizaron, son basados en la bibliografía revisada
Tabla 7.Muestras de manchas de sangre inducidas a degradación.
CÓDIGO NUMERO MUESTRA SUSTRATO ANTIGUEDAD
CG-MA 31 SANGRE CÁMARA ALGODÓN 15 DÍAS 32 25 DÍAS 33 35 DÍAS 34 50 DÍAS 35 60 DÍAS 36 15 DÍAS 37 25 DÍAS 38 35 DÍAS 39 50 DÍAS 40 60 DÍAS
Las manchas de sangre inducidas a degradación, descritas con su respectivo código CG-MA (Cingen Muestra Antigua) de la siguiente tabla se sometieron a Tº de 45ºC, humedad relativa 25% y luz UV-
Ionizante durante un intervalo de 15 a 60 días.
Los parámetros y los intervalos de temperatura se establecieron como temperatura de (45 °C) y solo registrándose la humedad relativa del ambiente 25% estas muestras fueron expuestas por un intervalo de tiempo de exposición de 15 hasta los 60 días.
Tabla 8. Factores que influyen en las diferentes muestras de manchas de sangre de data antigua.
MUESTRAS TEMPERATURA
HUMEDAD RELATIVA AMBIENTE
TIEMPO LUZ UV LUZ
AMBIENTE CONTROL (-) 4ºC 22-30% < 7 DIAS NO NO ALMACENADAS A Tº AMBIENTE Tº AMBIENTE 22-30% 2-18 AÑOS NO NO Tº AMBIENTE 22-30% 189 AÑOS NO SI CONTROL (+) INDUCIDAS 45ºC 25-30% 15-60 DIAS SI NO
66 PRUEBAS PRESUNTIVAS DE SANGRE
5.
5.1. Pruebas orientativas de sangre
Las diferentes pruebas orientativas con las que se trabajó fueron las siguientes: Leucomalaquita, Luminol y fenolftaleína o de Kastle-Mayer.
Fueron aplicadas solo a las muestras que se desconoce su origen, para poder confirmar su origen.
Tabla 9. Muestras custodiadas a las que se aplicó las pruebas de identificación presuntiva de
sangre.
CÓDIGO NUMERO MUESTRA SUSTRATO ANTIGÜEDAD
CG-MA 1 SANGRE ALGODÓN 3 AÑOS 25 GUANTE ALGODÓN 15 POLERA 5 AÑOS 16 CHOMPA 12 ALGODON 28 TOCUYO 17 AÑOS
Se realizó las pruebas orientativas, las tres pruebas orientativas, Leucomalaquita, Luminol y fenolftaleína o de Kastle-Mayer fueron aplicadas a las muestras descritas en la tabla.
5.2. Prueba confirmatoria de sangre RSID